Isolierung bakterieller extrazellulärer Vesikel mittels Größenausschlusschromatographie

Nehmen Sie eine Größenausschlusschromatographie oder eine SEC-Säule, die mit porösen Harzkügelchen definierter Größe gefüllt ist. Er enthält oben ein Probenreservoir.

Fügen Sie phosphatgepufferte Kochsalzlösung oder PBS hinzu, um die Säulenkügelchen auszugleichen, und verwerfen Sie den Durchfluss.

Laden Sie ein konzentriertes Bakterienkulturfiltrat, das extrazelluläre Vesikel oder EVs, sekretierte Proteine und Kontaminanten enthält.

EVs sind lipidbasierte Nanovesikel, die bioaktive Moleküle tragen und von Bakterien sezerniert werden.

Sobald das Filtrat in die Kügelchen eindringt, füge PBS hinzu, um es durch das Harzbett zu treiben.

Das ursprüngliche Eluat mit großen nicht-vesikulären Verunreinigungen ist zu verwerfen.

Platzieren Sie ein Auffangröhrchen unter dem Auslass und fügen Sie nacheinander PBS hinzu.

Großformatige EVs umgehen die kleineren Harzporen, bewegen sich durch die Zwischenräume zwischen den Kügelchen und eluieren zuerst.

Kleinere Proteine und Verunreinigungen dringen in die Poren ein, nehmen längere Wege und eluieren später.

Sammeln Sie die früh eluierenden Fraktionen, die EVs enthalten, und bewahren Sie sie für die Analyse auf.

Für die Isolierung der EVs führen Sie eine Größ