Fluoreszenzbildgebung von Biomaterial-assoziierten bakteriellen Infektionen in Zebrafischembryonen

Beginnen Sie mit anästhesierten Zebrafischembryonen, die mit fluoreszenzmarkierten pathogenen Bakterien injiziert werden, entweder allein oder gemischt mit Biomaterial-Mikrosphären, um eine Biomaterial-assoziierte Infektion in vivo zu modellieren.

Stellen Sie eine Petrischale mit Basalmedium mit Betäubungsmittel auf den Tisch eines Stereofluoreszenzmikroskops, das mit entsprechenden Filtern ausgestattet ist.

Geben Sie Methylcelluloselösung in die Schale, um ein viskoses Medium zu erzeugen, das die Embryonen für die Bildgebung immobilisiert.

Übertragen Sie einzelne Embryonen in die Methylcellulose und richten Sie sie horizontal aus, so dass die Injektionsstelle sichtbar ist.

Fokussieren Sie sich mit dem Hellfeldfilter auf die Injektionsstelle, um den infizierten Bereich zu erreichen.

Stellen Sie die Z-Stapel-Bildgebungsparameter ein und erfassen Sie Fluoreszenzbilder in verschiedenen Tiefen, um die Infektionsdynamik in drei Dimensionen zu erfassen.

Analysieren Sie mit Hilfe von Software die im Laufe der Zeit aufgenommenen Bilder, um die Fluoreszenzintensität zu quantifizieren und die Bakterienverteilung zu überwachen.

Dieses Protokoll ermöglicht einen direkten Vergleich des Infektionsverla