Eine empfindliche visuelle Methode zum Nachweis von Schwefelwasserstoff produzierenden Bakterien

Beginnen Sie mit einer Platte, die eine Suspension verschiedener Schwefelwasserstoff produzierender Bakterien enthält, die in der Lage sind, schwefelreiche Verbindungen zu verstoffwechseln.

Fügen Sie eine Wismutchloridlösung hinzu, die L-Cystein als Schwefelquelle enthält, und inkubieren Sie die Mischung kurz.

Während der Inkubation verwerten die Bakterien L-Cystein und produzieren Schwefelwasserstoff, der mit Wismut-Ionen zu einem unlöslichen schwarzen Wismutsulfidniederschlag reagiert.

Diese Reaktion ändert die Farbe der Lösung von hellgelb zu schwarz, was auf die Produktion von Schwefelwasserstoff hinweist.

Führen Sie als Nächstes den Assay mit unterschiedlichen Konzentrationen von Natriumhydrosulfid als Schwefelwasserstoffstandard durch und fügen Sie Wismutchlorid hinzu.

Dadurch entsteht ein Farbverlauf von hell bis intensiv schwarz, der den Schwefelwasserstoffgehalt darstellt.

Verwenden Sie nun diesen Gradienten, um den Schwefelwasserstoffgehalt in den Bakterienproben visuell zu vergleichen und abzuschätzen, was den schnellen Nachweis von Schwefelwasserstoff produzierenden Bakterien ermöglicht.

Mischen Sie 100 Mikroliter Bakterienkultur mit 100 Mikrolitern neu zubereiteter Wismutlösung in den 96-Well-Mikrotiterplatten und kultivieren Sie sie 20 Minuten lang bei 37 Grad Celsius. Führen Sie die Analyse für jeden Bakterienstamm in dreifacher Ausfertigung durch.

Überprüfen Sie nach 20 Minuten, ob sich die Farbe verändert hat. Ändert sich die Farbe der Lösung von hellgelb zu schwarz, deutet dies darauf hin, dass das Bakterium in der Lage ist, Schwefelwasserstoff oder H2S zu produzieren. Wiederholen Sie diese Messung dreimal.

Bestimmen Sie die Empfindlichkeit der Methode anhand unterschiedlicher Konzentrationen von Natriumhydrosulfid, gemischt mit Wismutsulfidlösung. Bestimmen Sie schließlich das Vorhandensein von Bisulfid- und Sulfidionen, indem Sie die Bildung eines schwarzen Wismutsulfidniederschlags beobachten. Bewerten Sie die Farbe der Vertiefungen mit einer visuellen Skala von keiner Farbproduktion bis zur dunkelsten schwarzen Farbproduktion.