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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:48 Min. • September 26th, 2025
Nehmen Sie eine Küvette, die eine Arbeitslösung von Thioflavin T enthält, einem Amyloid-spezifischen Fluoreszenzfarbstoff, der in phosphatgepufferter Kochsalzlösung gelöst ist.
Legen Sie die Küvette in ein Spektrofluorometer und zeichnen Sie das Fluoreszenzsignal in der Basislinie auf.
Halten Sie den Scan an und entfernen Sie die Küvette.
Fügen Sie den filtersterilisierten Kulturüberstand hinzu, der aus pulmonalen Endothelzellen gewonnen wurde, die mit virulenten Pseudomonas-Bakterien infiziert waren.
Der Überstand enthält Amyloid-Aggregate, bei denen es sich um fehlgefaltete, beta-faltblattreiche Proteine handelt.
Mischen Sie den Inhalt vorsichtig durch Inversion, um eine gleichmäßige Verteilung zu gewährleisten.
Laden Sie die Küvette erneut in das Spektrofluorometer und setzen Sie den Scanvorgang fort, um ein zeitbasiertes Fluoreszenzsignal zu erhalten.
Thioflavin T bindet spezifisch an beta-faltblattreiche Amyloide, was zu einer erhöhten Fluoreszenz führt.
Führen Sie einen Fluoreszenzscan mit den gleichen Einstellungen durch.
Ein Anstieg der Fluoreszenz im Vergleich zum Ausgangswert weist auf das Vorhandensein und die relative Häufigkeit von infektionsinduzierten Amyloiden im Kulturübers
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