Präparation und Isolierung von Streptomyces venezuelae Sporen aus einer Flüssigkultur

Beginnen Sie mit einem Kolben, der eine Quelle enthält und mit einem nährstoffreichen Medium gefüllt ist, das den gesamten Lebenszyklus der Streptomyces venezuelae-Bakterien unterstützt.

Impfen Sie die Bakteriensporen in das Medium und inkubieren Sie es durch Schütteln, um eine gute Belüftung und Nährstoffverteilung zu gewährleisten.

Die Feder verbessert die Durchmischung und unterstützt ein gleichmäßiges und gleichmäßiges Wachstum.

Die Sporen nehmen Nährstoffe auf und keimen, wobei sie Keimröhren produzieren, die sich an ihren Spitzen ausdehnen, sich in Hyphen verzweigen und sich zu einer Myzelstruktur entwickeln.

Wenn die Nährstoffe begrenzt werden, produziert der Organismus spezielle sporogene Hyphen, die sich teilen und Sporen, ruhende Fortpflanzungszellen, produzieren.

Beobachten Sie unter einem Phasenkontrastmikroskop, um das Vorhandensein von Myzelfragmenten und Sporen zu bestätigen.

Zentrifugieren Sie die Kultur, um die schwereren Myzelreste zu pelletieren, wobei leichtere Sporen im Überstand verbleiben.

Den Überstand in ein Mikroröhrchen umfüllen und auf Eis legen, um eine vorzeitige Keimung zu verhindern.

Verdünnen Sie die Sporensuspension in frischem Medium und lagern Sie sie bis zur weiteren Verwendung unter kalten Bedingungen.

Beimpfen Sie 30 Milliliter supplementiertes Wachstumsmedium mit 10 Mikrolitern Sporen des abzubildenden Stammes S.venezuela . Für ein gleichmäßiges Wachstum und eine gleichmäßige Sporulation der Zellen verwenden Sie einen Kolben mit Schotter oder einen Kolben, der eine Feder enthält, um eine ausreichende Belüftung zu ermöglichen.

Kultivieren Sie die Zellen für 35 bis 40 Stunden bei 30 Grad Celsius und 250 U/min. Wenn Sie fertig sind, sollten Sie in der Lage sein, die Myzelfragmente und Sporen mittels flüssigkeitsgelagerter Phasenkontrastmikroskopie zu sehen. Zentrifugieren Sie einen Milliliter der Kultur in einer Tischzentrifuge bei 400-fachem G für eine Minute, um das Myzel und die größeren Zellfragmente zu pelletieren.

Übertragen Sie dann etwa 300 Mikroliter des Überstandes, der eine Suspension von Sporen enthält, in ein neues 1,5-Millimeter-Röhrchen und legen Sie das Röhrchen auf Eis.