JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:20 Min. • September 26th, 2025
Beginnen Sie mit einer Versuchspflanze mit genetisch veränderten Blattregionen, die große nicht-fluoreszierende Fragmente des grün fluoreszierenden Superordner-Proteins oder sfGFP exprimieren.
Injizieren Sie diese modifizierten Bereiche mit Pseudomonas-Bakterien , die Effektorproteine enthalten, die mit dem kleinen nicht fluoreszierenden Fragment von sfGFP markiert sind.
Inkubieren, um eine Interaktion zwischen den Bakterien und den Blattzellen zu ermöglichen.
Mit Hilfe eines speziellen Sekretionssystems bringt Pseudomonas die markierten Effektorproteine in das Zytosol des Blattes.
Die Nähe zwischen den großen und kleinen GFP-Fragmenten ermöglicht deren Assemblierung zu funktionellem fluoreszierendem sfGFP, das dann zur Plasmamembran transloziert.
Nach der Inkubation sind die Blattscheiben aus den injizierten Bereichen herauszuschneiden.
Visualisieren Sie diese Scheiben mit einem konfokalen Laserscanning-Mikroskop.
Bilden Sie zunächst die Blattscheibe mit geringer Laserintensität ab, um die Autofluoreszenz zu minimieren. Erhöhen Sie dann die Laserleistung, um die Sichtbarkeit zu verbessern.
Die grüne Fluoreszenz bestätigt die erfolgreiche bakterielle Infektion und den Transport des Effekto
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