Quantifizierung von bakteriellem Alginat mit einem Antikörper-basierten enzymgebundenen Immunsorbent-Assay

Nehmen Sie eine Mikroplatte mit einer Probe, die Alginat enthält, ein schützendes Exopolysaccharid, das vom Bakterium Pseudomonas aeruginosa produziert wird.

Bereiten Sie eine serielle Verdünnung eines aus Alginat abgeleiteten Standards vor, um die Alginatkonzentration in der Probe zu quantifizieren.

Fügen Sie einen Beschichtungspuffer hinzu und inkubieren Sie, um die Haftung der Moleküle an der Well-Oberfläche zu erleichtern.

Waschen, um ungebundene Moleküle zu entfernen.

Inkubieren Sie mit einem Blockiermittel, um unspezifische Bindungsstellen zu maskieren.

Waschen und dann mit alginatspezifischen Primärantikörpern inkubieren.

Erneut waschen und dann mit enzymkonjugierten Sekundärantikörpern inkubieren, die auf die Primärantikörper abzielen.

Waschen und dann mit einem chromogenen Substrat inkubieren, das das Enzym oxidiert, um ein farbiges Produkt herzustellen.

Fügen Sie eine saure Lösung hinzu, die die Reaktion stoppt und die Farbe verbessert, um eine kolorimetrische Detektion zu ermöglichen.

Messen Sie mit einem Mikroplatten-Reader die Farbintensität.

Erstellen Sie eine Standardkurve aus den Intensitäten der Standardverdünnungen und stellen Sie die Probenintensität grafisch dar, um die A