JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:30 Min. • September 26th, 2025
Um auf bakterielle Resistenz bei verschiedenen Tomatenstämmen zu untersuchen, beginnen Sie mit 10 Tage alten Tomatensämlingen, die unter sterilen Bedingungen angebaut werden.
Diese Sämlinge zeigen hervorgehende echte Blätter und etablierte Wurzeln.
Fluten Sie beide Stämme mit pathogenen Bakterien, die mit einem Tensid vermischt sind, um eine gleichmäßige Ausbreitung des Inokulums auf der Pflanzenoberfläche zu erleichtern. Kippen und schwenken Sie die Platte, um den Kontakt des Sämlings mit dem Inokulum zu maximieren.
Entfernen Sie das überschüssige Inokulum, verschließen Sie die Platten wieder und inkubieren Sie sie in einer Wachstumskammer.
Die Bakterien dringen durch Spaltöffnungen ein und besiedeln den Apoplasten, den extrazellulären Raum zwischen den Blattzellen.
Die Bakterien injizieren Effektorproteine in Pflanzenzellen, um die Immunantwort der Pflanzen zu unterdrücken.
Die anfälligen Stämme erkennen diese Effektoren nicht, was zu einer bakteriellen Vermehrung und einer durch bakterielle Toxine induzierten Schädigung des Pflanzengewebes führt.
Die resistenten Stämme erkennen die Effektoren und produzieren reaktive Sauerstoffspezies, um die Bakterien abzutöten.
Nach der Inkubation zeigen resistente Stämme ein anhaltendes Wachstum, während anfällige Stämme eine verzögerte Entwicklung aufweisen.
Übertragen Sie die Platten mit den zehn Tage alten Setzlingen aus der Wachstumskammer in die Biosicherheitswerkbank und entfernen Sie das chirurgische Klebeband. Übertragen Sie dann sechs Milliliter Inokulum auf jede Platte.
Schieben Sie die Sämlinge vorsichtig mit einer Pipettenspitze in das Inokulum und starten Sie einen Timer für drei Minuten. Halten Sie einen Teller in jeder Hand und kippen Sie die Vorderseite des Tellers nach unten, um die Keimblätter und Blätter der Sämlinge einzutauchen. Schwenken Sie das Inokulum fünf- bis siebenmal von einer Seite zur anderen und kippen Sie dann die Platten zurück, um die Wurzeln mit dem Inokulum zu bedecken.
Kippen Sie die Platten wieder nach unten und wiederholen Sie den Zyklus für insgesamt drei Minuten. Gießen Sie das Inokulum von den Platten, legen Sie es auf eine ebene Fläche und gießen Sie das restliche Inokulum ein zweites Mal ab. Wickeln Sie die Platten wieder ein und legen Sie sie wieder in die Wachstumskammer.