Lokalisierte Abgabe von Bakterien in das Darmlumen einer Zebrafischlarve mittels Mikroinjektion

Nimm eine Schale, die eine betäubte Zebrafischlarve enthält.

Tragen Sie einen Tropfen niedrigschmelzende Agarose auf die Larve auf und positionieren Sie sie vorsichtig seitlich, um den Darmzugang während der Injektion zu ermöglichen.

Nun die Agarose kurz abkühlen lassen, um sie zu verfestigen und dadurch die Larve ruhig zu stellen.

Fügen Sie Medien hinzu, die ein Anästhetikum enthalten, um die Larve unter Narkose zu halten.

Nehmen Sie als Nächstes eine Suspension von fluoreszenzmarkiertem Clostridioides difficile, einem pathogenen Bakterium, und fügen Sie einen Tracerfarbstoff hinzu, um die Überwachung der Injektion zu erleichtern.

Laden Sie diese Mischung in eine Mikroinjektionsnadel und montieren Sie die Nadel auf einen Mikromanipulator.

Positionieren Sie die Nadel unter einem Stereomikroskop in einem Winkel, der auf den Larvendarm gerichtet ist.

Führen Sie dann die Nadelspitze vorsichtig in das Darmlumen ein.

Injizieren Sie die Bakterien direkt in das Lumen und bestätigen Sie die erfolgreiche Abgabe mit dem Tracer-Farbstoff. Ziehen Sie dann die Nadel zurück.

Bestätigen Sie mit Hilfe der Fluoreszenzmikroskopie die Lokalisation von Clostridioides difficile im Larvendarm.

Geben Sie zunächst