Isolierung und Kultivierung von Clostridioides difficile Bakterien aus dem Zebrafischdarm der Larve

Beginnen wir mit einer euthanasierten Zebrafischlarve, deren Darm mit Clostridioides difficile, einem pathogenen anaeroben Bakterium, infiziert ist.

Befestigen Sie den oberen dorsalen Rumpf der Larve und entfernen Sie ihren Kopf, um die inneren Organe freizulegen.

Sichern Sie den mittleren dorsalen Rumpf und isolieren Sie den Darm sanft von der Körperhöhle.

Den isolierten Darm in ein Mikrozentrifugenröhrchen mit Puffer überführen.

Homogenisieren Sie den Darm mit einem Stößel, um das Gewebe zu stören und die Darmmikroben freizusetzen.

Das Homogenat in ein Röhrchen mit selektiven Aufzuchtmedien überführen, die mit Antibiotika versetzt sind.

Inkubieren Sie das Homogenat in einer anaeroben Kammer.

Anaerobe Bedingungen hemmen das Wachstum aerober Bakterien, während Antibiotika spezifisch auf das Wachstum nativer anaerober Darmmikroben abzielen und es unterdrücken.

Clostridioides difficile ist resistent gegen diese Antibiotika und vermehrt sich unter anaeroben Bedingungen.

Nährstoffe und Wachstumsfaktoren in den Aufzuchtmedien fördern die Zellteilung weiter und ermöglichen das Wachstum lebensfähiger Clostridioides difficile.

Nach dem Einschläfern der infizierten Zebrafischlarven wird eine Nadel in