JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologie
0 Ansichten • 2:46 Min. • September 26th, 2025
Beginnen Sie mit einer Flüssigkultur von Sporosarcina pasteurii in einem nährstoffreichen Medium.
Nehmen Sie eine Anreicherungs-Stammlösung, die Harnstoff, Calciumchlorid, Ammoniumchlorid und Natriumbicarbonat enthält.
Geben Sie einen Teil des Anreicherungsmediums in das Bakterienkulturröhrchen.
Wirbeln Sie die Röhren auf, um die Bakterienzellen und Nährstoffe gleichmäßig zu vermischen.
Inkubieren Sie die angereicherten Kulturen in einem wackelfreien Inkubator.
Sporosarcina pasteurii, ein grampositives Bodenbakterium, produziert das Enzym Urease in Gegenwart von Harnstoff.
Urease spaltet Harnstoff in Ammonium- und Karbonat-Ionen auf.
Ammoniumchlorid und Natriumbicarbonat tragen zur Aufrechterhaltung eines alkalischen pH-Werts bei, der die mineralische Ausfällung unterstützt.
Karbonat-Ionen reagieren mit Calcium-Ionen aus Calciumchlorid zu unlöslichem Calciumcarbonat.
Dieser Niederschlag beginnt sich um die Bakterienzellen zu bilden und kristallisiert zu Calcit, einer stabilen Kristallform.
Diese Kristalle setzen sich als weiße Ablagerungen am Boden des Röhrchens ab und zeigen eine mikrobiologisch induzierte Calcitfällung (MICP).
Neun Milliliter der vorbereiteten Flüssigkultur werden in mehrere sterilisierte Zentrifugenröhrchen mit zehn Millilitern überführt. Bereiten Sie 100 Milliliter der externen Anreicherungslösung vor, indem Sie mit einer Analysenwaage vorsichtig zwei Gramm pro Liter Harnstoff, ein Gramm pro Liter Ammoniumchlorid, 212 Milligramm pro Liter Natriumbicarbonat und 280 Milligramm pro Liter Calciumchlorid abmessen.
In einem Becherglas mit frischem Medium alle Zutaten außer dem Harnstoff vermischen und autoklavieren. Nach dem Autoklavieren wird der Harnstoff mit einem Milliliter frischem Medium gemischt und die Lösung durch eine Spritze mit einem 0,2-Mikrometer-Filter geleitet, bevor sie dem Anreicherungsmedium zugesetzt wird. Geben Sie einen Milliliter des Anreicherungsmediums mit Additiven in die sterilisierten Zentrifugenröhrchen, die neun Milliliter der vorbereiteten Kultur enthalten.
Jedes Röhrchen verwirbeln und in einem schüttelfreien Inkubator bei 30 Grad Celsius inkubieren. Überwachen Sie alle Geräte regelmäßig auf den Beginn des Niederschlags.