Hochdurchsatz-Identifizierung von bakterienabweisenden Polymeren mittels Microarray-Screening

Legen Sie einen sterilisierten, mit Agarose beschichteten Microarray-Objektträger mit mehreren Polymerspots in eine Multiwell-Platte. Die Agarose minimiert die unspezifische bakterielle Bindung.

Geben Sie eine gemischte Bakterienkultur in den Objektträger und inkubieren Sie ihn unter leichtem Rühren.

Bakterien sezernieren unterschiedliche Adhäsionsproteine, die an günstige Polymerflecken binden, was im Laufe der Zeit zu einer stärkeren bakteriellen Anheftung und Besiedlung führt.

Umgekehrt widerstehen abstoßende Polymere der Proteinadsorption und reduzieren die Anheftung von Bakterien.

Spülen Sie den Objektträger mit phosphatgepufferter Kochsalzlösung oder PBS, um lose gebundene Bakterien zu entfernen.

Fügen Sie DAPI hinzu, um die DNA von oberflächenhaftenden Bakterien zu färben.

Waschen Sie die Folie mit PBS, trocknen Sie sie und versiegeln Sie sie mit einem selbstklebenden Deckglas.

Sterilisieren Sie die äußere Oberfläche des Objektträgers mit Ethanol.

Nehmen Sie Hellfeldbilder auf, um die Polymerflecken zu lokalisieren. Wechseln Sie dann in den Fluoreszenzmodus, um die Fluoreszenz auf den Polymerspots zu erkennen.

Polymerflecken, die eine verminderte Fluoreszenz aufweisen, weisen auf eine minimale bakterielle Anheftung hin und werden als bakterienabweisende Polymere identifiziert.

Nach der Kultivierung und Vorbereitung der Inokula für die Microarrays gemäß dem Textprotokoll werden die UV-sterilisierten Polymer-Microarrays in rechteckige Vier-Well-Platten gelegt und sechs Milliliter gemischte Bakterienkulturen hinzugefügt. Inkubieren Sie die Platten bei 37 Grad Celsius unter leichtem Rühren fünf Tage lang. Verwenden Sie nach der Inkubation PBS, um die Microarrays zweimal vorsichtig zu spülen.

Fügen Sie dann ein Mikrogramm pro Milliliter DAPI in PBS hinzu und inkubieren Sie es 30 Minuten lang. Übertragen Sie als Nächstes die Microarrays auf eine frische Vier-Well-Platte, bedecken Sie die Microarrays mit PBS und schwenken Sie sie vorsichtig. Wechseln Sie dann das PBS einmal und wiederholen Sie den Waschgang.

Trocknen Sie die Microarrays nach dem Spülen unter einem Luftstrom, tragen Sie dann eine Siegelfolie auf und kleben Sie Glasabdeckfolien auf die Microarray-Objektträger. Wenn der Kleber trocken ist, verwenden Sie 70% Ethanol, um die Außenfläche zu sterilisieren. Mit einem Fluoreszenzmikroskop, das mit einem 20-fach subjektiven Mikroskop ausgestattet ist, werden Einzelbilder für jeden Polymerfleck in Hellfeld- und DAPI-Kanälen aufgenommen.