Zubereitung des biolumineszierenden enterohämorrhagischen Escherichia coli Inokulums

Beginnen Sie mit einer gefrorenen Brühe von enterohämorrhagischen Escherichia coli oder EHEC, einem pathogenen Darmbakterium.

Diese Bakterien tragen ein Plasmid, das Luciferase für die biolumineszierende Bildgebung in Echtzeit exprimiert, und ein Antibiotikaresistenzgen für die Selektion.

Streifen Sie die Bakterien auf eine Agarplatte, die das entsprechende Antibiotikum enthält, und inkubieren Sie, um einzelne plasmidhaltige Kolonien zu isolieren.

Wählen Sie eine einzelne Kolonie aus und kultivieren Sie sie in einer mit Antibiotika angereicherten Brühe. Inkubieren, um eine genetisch einheitliche, plasmidstabile Population zu vermehren.

Expandieren Sie die Kultur unter belüfteten Bedingungen, um Zellen im logarithmischen Wachstum zu synchronisieren.

Überwachen Sie das Bakterienwachstum, bis die gewünschte optische Dichte erreicht ist.

Zentrifugieren Sie anschließend die Kultur, um die Bakterien zu pelletieren.

Entfernen Sie den Überstand und waschen Sie das Pellet mit steriler Kochsalzlösung.

Erneut zentrifugieren. Entsorgen Sie den Überstand und suspendieren Sie das Pellet in einem kleineren Volumen Kochsalzlösung.

Diese konzentrierte EHEC-Suspension ist nun bereit für das biolumineszenzbas