Präparation und Induktion von Borrelia burgdorferi-Kulturen für die Herstellung von Viruspartikeln

Beginnen Sie mit einer Kultur eines gentechnisch veränderten Stammes von Borrelia burgdorferi, einem pathogenen Bakterium.

Dieser Stamm trägt ruhende Bakteriophagen-DNA, die in sein Genom integriert ist, das so verändert wurde, dass es ein Zielgen enthält, das Antibiotikaresistenz verleiht.

Fügen Sie das entsprechende Antibiotikum hinzu und inkubieren Sie die Kultur. Das Antibiotikaresistenz-Gen exprimiert ein Protein, das das Antibiotikum hemmt und dafür sorgt, dass sich nur Bakterien vermehren, die das Gen beherbergen.

Sobald die Kultur die gewünschte Dichte erreicht hat, zentrifugieren Sie die Zellen, um sie zu pelletieren, und entsorgen Sie den Überstand.

Resuspendieren Sie das Pellet, führen Sie einen chemischen Induktor ein und inkubieren Sie, um DNA-Schäden zu induzieren.

Die resultierende DNA-Reparaturreaktion schneidet die DNA des Bakteriophagen aus und initiiert ihre Replikation, die Expression von Strukturproteinen und den Zusammenbau neuer Virionen, die das Antibiotikaresistenz-Gen tragen.

Zentrifugieren Sie die Kultur erneut, verwerfen Sie den Überstand und resuspendieren Sie die Zellen in einem frischen Medium.

Die Bakterienzellen, die reife Virionen enthalten, sind bereit f