JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologie
0 Ansichten • 2:02 Min. • September 26th, 2025
Beginnen Sie mit einem Röhrchen mit einer Bakterienkultur, die genetisch verändert wurde, um als Biosensor zu fungieren.
Die Bakterien beherbergen ein Plasmidsystem mit einem rot fluoreszierenden Protein oder RFP-Gen, das von einem Promotor kontrolliert wird. Der Promotor wird von einem Protein unterdrückt, das empfindlich auf das Vorhandensein eines bestimmten Analyten, wie z. B. Blei, reagiert.
Verwenden Sie ein Tuch auf Ethanolbasis, um eine Testoberfläche gründlich abzuwischen, und sammeln Sie den auf der Oberfläche vorhandenen Analyten.
Schneiden Sie einen kleinen Abschnitt aus der Mitte des Tuchs ab und tauchen Sie ihn vollständig in die Bakterienkultur.
Inkubieren, um die Diffusion des Analyten aus dem Tuch in die Bakterienkultur zu erleichtern.
Der Analyt dringt in die Bakterien ein und bindet an das Repressorprotein, wodurch seine Konformation verändert und der Promotor aktiviert wird.
Der aktivierte Promotor initiiert die Gentranskription, die zur Expression des RFP führt.
Messen Sie die bakterielle Fluoreszenz, um sicherzustellen, dass der Analyt auf der Testoberfläche vorhanden ist.
Verwenden Sie ein Tuch auf Ethanolbasis, das zum Entfernen von Blei entwickelt wurde, um alle Oberflächen der Hände, einschließlich zwischen den Fingern, abzuwischen. Bewahren Sie die Tücher bis zur Analyse in einem entsprechend gekennzeichneten, verschließbaren Beutel auf. Verwenden Sie ein Tuch auf Alkoholbasis, um alle großen Oberflächen, die getestet werden sollen, abzuwischen.
Verwenden Sie ein mit Ethanol angefeuchtetes Wattestäbchen, um alle kleinen Oberflächen, die getestet werden sollen, abzuwischen. Schneiden Sie mit sauberen Handschuhen und einer Schere, die mit Alkohol gereinigt wurde, einen Abschnitt ab, der etwa einen Quadratzentimeter aus der Mitte des Tuchs herausragt. Legen Sie dann das abgeschnittene Stück Tuch oder Wattestäbchen direkt in ein Kulturröhrchen, das zwei Milliliter der Sensorbakterien enthält, und stellen Sie sicher, dass es vollständig in die Brühe eingetaucht ist.