Schwarm-Assay zur Visualisierung der bakteriellen Oberflächenmotilität

0 views • 2:46 min • September 26th, 2025

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Beginnen Sie mit einem Röhrchen mit beweglichen Bakterien, die grün fluoreszierendes Protein exprimieren.

Platzieren Sie die Bakterien mit einer Nadel auf einer weichen Nähragarplatte, um die Oberflächenmotilität der Bakterien zu untersuchen.

Als nächstes drehen Sie die Platte um, um Wasserkondensation auf der Agaroberfläche zu verhindern.

Inkubieren Sie die Platte, damit die Bakterien wachsen können.

Im Laufe der Inkubation nutzen die Bakterien ihre Geißeln, um die Wanderung vom Impfpunkt nach außen zu initiieren.

Sobald die Inkubation abgeschlossen ist, öffnen Sie den Deckel und legen Sie die invertierte Platte mit der Agarseite zum optischen Detektor in ein Bildgebungssystem, um eine genaue Bildgebung zu gewährleisten.

Setze den mit Wasser gefüllten Deckel über die Platte. Versiegeln Sie es, um eine feuchte Umgebung zu erhalten.

Schließen Sie das Bildgebungssystem und starten Sie die Zeitraffer-Bildaufnahme.

Im Laufe der Zeit erzeugt die bakterielle Migration einen grünen Daumen, der als Ranken bezeichnet wird. Diese bakteriellen Strukturen erstrecken sich vom zentralen Impfpunkt nach außen und bestätigen die Beweglichkeit der bakteriellen Oberfläche.

Beimpfen Sie ein bis fünf Mikroliter der Übernachtkultur über die getrockneten Schwarm-Agarplatten, indem Sie je nach Bakterienstamm mit einem sterilen Zahnstocher oder einer Draht-Impfnadel in die Agaroberfläche stechen und die Schwarm-Assay-Platten in einen Inkubator mit einer Temperatur von entweder 30 Grad Celsius, 37 Grad Celsius oder 42 Grad Celsius überführen. Drehen Sie die Platten so um, dass überschüssige Feuchtigkeit auf dem Plattendeckel und nicht auf dem Agar kondensiert, und gleichen Sie die Bakterien entweder zwei oder vier Stunden lang bei stammspezifischen Temperaturen aus, kurz bevor Sie die Zeitraffer-Bildgebung durchführen.

Übertragen Sie dann die Platten so in die In-vivo-Bildgebungseinheit, dass die Bakterien auf der Agaroberfläche nach unten in Richtung der invertierten Kamera der Einheit zeigen. Füllen Sie alle Deckel der Petrischale mit einer kleinen Menge Wasser. Legen Sie dann jeden Deckel mit der Wasserseite nach oben auf die umgedrehten Agarplatten.

Versiegeln Sie im Inneren der Bildgebungseinheit das Bildgebungsgehäuse, um eine konstante Luftfeuchtigkeit aufrechtzuerhalten, passen Sie die Bildgebungseinstellungen der Bildgebungseinheit an und beginnen Sie mit der Zeitrafferaufnahme der Schwarmaktivität. Nach der Echtzeit-Bildgebung kann die Schwarmdynamik der Bakterien mit Hilfe einer Standard-Bildanalyse wie Image J analysiert werden.

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Last updated: 18 July 2026