Etablierung einer binären Kultur von Saccharibakterien mit Wirtsbakterien

Beginnen Sie mit einem sterilen Röhrchen mit einem wirtsspezifischen Wachstumsmedium. Fügen Sie eine über Nacht gezüchtete Wirtsbakterienkultur hinzu.

Führen Sie dann ein Filtrat ein, das Saccharibakterien, ein parasitäres ultrakleines Bakterium, enthält, um eine binäre Kultur zu etablieren.

Inkubieren Sie die binäre Kultur unter mikroaeroben Bedingungen, die für die Wirtsbakterien optimal sind.

Die Nährstoffe im Medium fördern das Wachstum und die Vermehrung von Wirtsbakterien, wodurch die Kultur trüb wird.

Aufgrund ihrer obligat parasitären Natur heften sich Saccharibakterien an die Oberfläche der Bakterienzellen des Wirts.

Diese Bakterien bilden dann enge Membrankontakte mit dem Wirt und extrahieren Nährstoffe, die für ihr Überleben und ihre Vermehrung unerlässlich sind.

Mit fortschreitender Infektion verlangsamt sich das Wachstum des bakteriellen Wirts, was zu einer verminderten Trübungen führt.

Um das kontinuierliche Wachstum zu unterstützen, übertragen Sie die binäre Kultur in regelmäßigen Abständen in ein frisches Medium.

Dies erhält die Lebensfähigkeit des Wirts und fördert die langfristige Stabilität der binären Kultur.

Bereiten Sie Kulturröhrchen vor, indem Sie zwei Milliliter des geeigneten Wachstumsmediums in die Röhrchen aliquotieren.

Geben Sie dann 200 Mikroliter Übernachtkultur von Wirtsorganismen und 100 bis 200 Mikroliter resuspendierte gefilterte Probe in jedes Röhrchen. Die kombinierten Proben werden unter Bedingungen inkubiert, die für den Wirtsorganismus geeignet sind. Passieren Sie die Zellen alle zwei bis drei Tage, indem Sie 200 Mikroliter der binären Kultur in zwei Milliliter frisches Wachstumsmedium in einem neuen Röhrchen überführen.

Wenn die passageierten Kulturen bei 200 Mikrolitern nicht infizierter Wirtskultur kein Wachstum zeigen, werden die inokulierten Röhrchen beim Passieren der Zellen wieder in den Inkubator zurückgeführt.