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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:41 Min. • September 26th, 2025
Beginnen Sie mit einem Bakterienpellet. Die Bakterien enthalten ein Gen, das für ein Initiatorprotein kodiert, aber kein Antibiotikaresistenzgen.
Suspendieren Sie das Pellet in gekühltem Wasser, um den Zellabbau zu minimieren.
Nehmen Sie ein Plasmid, das ein Antibiotikaresistenzgen und ein Zielgen trägt. Dieses Plasmid wird als Selbstmordplasmid bezeichnet, da es sich ohne das Initiatorprotein nicht vermehren kann.
Geben Sie das Plasmid in die Bakteriensuspension.
Die Suspension in eine gekühlte Küvette geben.
Initiieren Sie die Elektroporation, indem Sie einen Hochspannungsimpuls anlegen, der die Bakterienmembran vorübergehend aufbricht und das Plasmid eindringen lässt.
Geben Sie Rückgewinnungsmedium hinzu und geben Sie die Mischung in ein Kulturröhrchen.
Durch Schütteln inkubieren.
Nehmen Sie eine Agarplatte mit dem Antibiotikum und plattieren Sie die Kultur.
Das bakterielle Initiatorprotein bindet an den Ursprung der Replikation, wodurch das Plasmid in die Lage versetzt wird, sich zu replizieren und ein Antibiotikaresistenzprotein zu exprimieren.
Dies ermöglicht es den Bakterien mit dem Plasmid, zu überleben und zu wachsen, was die Plasmidvermehrung erleichtert.
Pelletieren Sie die Bakteri
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