Bewertung der durch pathogene Bakterien induzierten Mortalität bei Larven von C. elegans

Beginnen Sie mit einem pathogenen Bakterium, das auf Agar kultiviert wird.

Kratzen Sie die Bakterien ab, suspendieren Sie sie in einem Puffer und fügen Sie ein Medium hinzu, um die Lebensfähigkeit der Bakterien zu erhalten.

Geben Sie die Suspension in eine Mikrotiterplatte.

Nehmen Sie anschließend separate Stämme von C. elegans-Larven , entweder mit erhöhter Anfälligkeit für Krankheitserreger oder mit erhöhter Resistenz, und lassen Sie sie sich ansiedeln.

Entfernen Sie den Überstand, resuspendieren Sie die Larven in einem frischen Medium und geben Sie sie in die Mikrotiterplatte, die die Bakterien enthält.

Verschließen Sie die Mikroplatte mit einer gasdurchlässigen Membran und inkubieren Sie. Die Bakterien sezernieren toxische Stoffwechselprodukte, die Stresswege aktivieren und zum Zelltod führen.

Waschen Sie die Vertiefungen, um die Bakterien zu eliminieren, fügen Sie einen zellundurchlässigen Fluoreszenzfarbstoff hinzu und inkubieren Sie.

Der Farbstoff dringt nur in die abgestorbenen Larvenzellen mit gestörten Membranen ein und bindet an deren Nukleinsäuren.

Waschen Sie, um überschüssigen Farbstoff zu entfernen, und bilden Sie die fluoreszierend gefärbten Würmer ab, um die Mortalität bei