Mikroskopische Analyse des Bakterienwachstums unter Stress mit Hilfe von mikrofluidischen Kammern

Beginnen Sie mit einer mikrofluidischen Platte, die mit einem vorgewärmten Nährmedium gefüllt ist.

Befestigen Sie die Platte am Verteilersystem und versiegeln Sie das Setup. Treiben Sie das Medium durch die Kanäle, um Luftblasen zu entfernen.

Stellen Sie das Setup auf einen Mikroskoptisch und heizen Sie es vor, um eine Ausdehnung der Platte während der Bildgebung zu verhindern.

Entfernen Sie dann das Medium, führen Sie eine Bakterienkultur in die Zelleinlässe und ein stressinduzierendes Medium in die Lösungseinlässe ein.

Das stressauslösende Medium enthält ein Antibiotikum, das die Zellteilung stoppt, ohne eine Zunahme der Zellmasse zu hemmen.

Versiegeln Sie das System und initiieren Sie dann die Zellbeladung, um die Bakterien in die Kulturkammer der Platte zu übertragen.

Lokalisieren Sie mit Durchlicht ein Sichtfeld mit gleichmäßig verteilten Einzelzellen.

Injizieren Sie das stressauslösende Medium in die Kammer, um die Zellen dem Antibiotikum auszusetzen.

Nehmen Sie im Phasenkontrastmodus Zeitrafferbilder auf, um die Bildung länglicher filamentöser Zellen mit erhöhtem DNA-Gehalt zu beobachten, die durch die durch Antibiotika vermittelte Hemmung der Zellteilung verursacht werden.

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