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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:50 Min. • September 26th, 2025
Beginnen Sie mit einer Kultur einer Bakterienspezies, die für rekombinante Proteine kodiert, die mit dem Vesicle Nucleating Peptide (VNp) markiert sind, einem kurzen Peptid, das die Vesikelbildung fördert.
Fügen Sie der Kultur einen Induktor hinzu und inkubieren Sie. Der Induktor löst die Proteinexpression aus.
VNp bettet sich in die innere Membran ein und fördert die Membrankrümmung, indem es die VNp-markierten Proteine in knospende Vesikel einkapselt.
Übertragen Sie das vesikelreiche Medium in ein Röhrchen. Zentrifugieren Sie es, um den vesikelreichen Überstand zu trennen.
Filtrieren Sie anschließend den Überstand, um Restverunreinigungen zu entfernen.
Führen Sie dann das Filtrat durch einen weiteren Membranfilter, um Vesikel auf der Membranoberfläche einzufangen.
Legen Sie die Membran in eine Schale und fügen Sie phosphatgepufferte Kochsalzlösung hinzu.
Löse die Vesikel vorsichtig ab und übertrage die Suspension in ein sauberes Röhrchen.
Beschallen Sie die Suspension, um die Vesikelmembranen aufzubrechen und die Proteine freizusetzen.
Zentrifugieren Sie das Lysat, um Membranfragmente zu trennen.
Der resultierende Überstand enthält gereinigte rekombinante Proteine, die für die Analyse bere
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