JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:23 Min. • September 26th, 2025
Beginnen Sie mit einem gepufferten Reaktionsgemisch, das L-Methionin, einen Elektronendonor, Nitroblau-Tetrazolium oder NBT, einen Redoxindikator, und Flavinmononukleotid oder FMN, einen Photosensibilisator, enthält.
Geben Sie diese Mischung in ein Röhrchen, das das Bakterienpellet und den Wirbel enthält.
Gib die Lösung in ein Glasröhrchen.
Bestrahlen Sie nun das Gemisch mit violettem Licht, um FMN zu aktivieren, das ein Elektron von L-Methionin aufnimmt und ein reaktives Zwischenprodukt bildet.
Dieses Zwischenprodukt überträgt das Elektron auf gelösten molekularen Sauerstoff und erzeugt so reaktive Sauerstoffspezies oder ROS in der Nähe der Bakterienoberfläche.
Die daraus resultierende ROS schädigt zelluläre Bestandteile und verringert die Lebensfähigkeit der Bakterien.
Das ROS reduziert NBT auch zu Formazan, einem blau gefärbten Produkt, das sich in der Nähe der Bakterienoberfläche ablagert.
Füllen Sie das Gemisch in ein Röhrchen, zentrifugieren Sie es und entsorgen Sie den Überstand.
Suspendieren Sie das Pellet in einem organischen Lösungsmittel, um Formazan zu lösen.
Messen Sie schließlich die Absorption, um die lichtinduzierte bakterielle Inaktivierung durch ROS-Erzeugung zu bestimmen.
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos