Bestimmung der antibakteriellen Wirksamkeit eines mit Antibiotika beladenen Polymerstreifens

Nehmen Sie Spritzen mit antibiotikafreien und mit Antibiotika beladenen Polymerstreifen.

Füllen Sie die Spritzen mit einer stoffwechselaktiven Kultur pathogener Bakterien.

Inkubieren Sie die Spritzen durch Schütteln, um eine gleichmäßige bakterielle Exposition gegenüber dem Medium zu gewährleisten.

Während der Inkubation diffundieren Antibiotika aus dem beladenen Streifen in das Medium und hemmen das Bakterienwachstum.

In der Spritze mit dem antibiotikafreien Streifen vermehren sich die Bakterien.

Sammeln Sie die Bakteriensuspension aus jeder Spritze in Mikrozentrifugenröhrchen.

Übertragen Sie die Aliquote in eine Multiwell-Platte.

Fügen Sie eine Reagenzmischung hinzu, die Luciferin, Luciferase-Enzym und ein Lysemittel enthält.

Inkubieren Sie durch Schütteln, um eine bakterielle Lyse zu ermöglichen, bei der zelluläre Bestandteile, einschließlich ATP, freigesetzt werden. ATP treibt die Luciferase-vermittelte Lumineszenzreaktion an.

Zeichnen Sie die Lumineszenz mit einem Mikroplatten-Reader auf.

Bakterienkulturen, die dem mit Antibiotika beladenen Streifen ausgesetzt waren, wiesen im Vergleich zu Kulturen, die nicht mit Antibiotika belichtet waren, eine verringerte Lumineszenz auf.

Diese verminderte Lumineszenz bestätigt die antibakterielle Wirksamkeit des mit Antibiotika beladenen Streifens.

Legen Sie die mit Frischware und Arzneimittel beladenen UHMWPE-Streifen in eine Drei-Milliliter-Spritze. Anschließend wird MHB-haltige Bakteriensuspension durch die aufgesetzte Nadel bis zur 1,5-Milliliter-Markierung in die Spritze gezogen.

Legen Sie das Spritzenset bis zu den angegebenen Zeitpunkten von sechs Stunden und dann täglich bis zum siebten Tag auf einen Schüttelinkubator. Nehmen Sie nach jedem angegebenen Zeitpunkt die Spritze heraus und geben Sie das Medium in ein Zwei-Milliliter-Röhrchen. Führen Sie einen Echtzeit-Assay der mikrobiellen Lebensfähigkeit durch, wie im Manuskript beschrieben, unter Verwendung von 100 Mikrolitern Bakteriensuspension.