Isotherme Mikrokalorimetrie zur Überwachung der Stoffwechselaktivität in Bakterien

Nehmen Sie serielle Verdünnungen einer Bakterienkultur und geben Sie Aliquots in kalorimetrische Fläschchen, die Wachstumsmedium enthalten.

Laden Sie die versiegelten Fläschchen in die Multiwell-Platte eines isothermen Mikrokalorimeters, um die metabolische Wärmeproduktion zu messen.

Das Gerät wird auf einer konstanten Temperatur gehalten, um sicherzustellen, dass die erfasste Wärme ausschließlich aus dem bakteriellen Stoffwechsel stammt.

Wenn Bakterien Nährstoffe verstoffwechseln und sich vermehren, setzen sie Wärme frei, die von Sensoren in Echtzeit erfasst wird.

Inkubieren Sie parallel identische Fläschchen in einem Inkubator. Messen Sie mit einem Spektralphotometer die optische Dichte (OD), um das Bakterienwachstum zu überwachen.

Erstellen Sie unter Verwendung der kalorimetrischen Signale aus den Verdünnungen eine thermische Aktivitätskurve und korrelieren Sie diese mit den OD-Werten.

Ein scharfer erster Peak deutet auf eine aerobe Atmung während des exponentiellen Wachstums hin.

Wenn der Sauerstoffgehalt begrenzt wird, gehen die Zellen zur anaeroben Fermentation über, wodurch ein zweiter scharfer Peak entsteht.

Beim Eintritt in die stationäre Phase sezernieren die Bakterien Enzyme, um