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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:04 Min. • October 30th, 2025
Beginnen Sie mit Wildtyp-Amöbenzellen des Typs Dictyostelium discoideum , die in einem kalten Puffer suspendiert sind.
Der Puffer bietet eine ionische Umgebung, die die Stabilität der Membran aufrechterhält.
Geben Sie dann die Amöbenzellen in ein Röhrchen, das ein Plasmid mit dem Zielgen enthält.
Mischen Sie die Lösung vorsichtig, um die Plasmide in engen Kontakt mit der Amöbenoberfläche zu bringen.
Diese Mischung wird in eine vorgekühlte Elektroporationsküvette überführt und die Elektroporation durchgeführt.
Bei der Elektroporation entstehen durch die elektrischen Impulse transiente Poren in der Zellmembran.
Durch diese Poren gelangt das Plasmid in das Zytoplasma und transloziert anschließend in den Zellkern.
Übertragen Sie dann die Amöbenzellen in eine Petrischale, die ein flüssiges Medium enthält, das mit Feeder-Bakterien angereichert ist.
Die Amöbe frisst Bakterien über Phagozytose, liefert essentielle Nährstoffe für die Zellregeneration und ermöglicht die Plasmidexpression.
Feeder-Bakterien unterstützen die Transfektion in Wildtyp-Amöbenzellen, ohne dass spezielle Stämme benötigt werden, die ohne Bakterien wachsen.
Resuspendieren Sie die Zellen in H40-Puffer.
Geben Sie als nächstes 100 M
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