Anreicherung bakterieller Lipoproteine mittels nichtionischer Detergenzien-Phasentrennung
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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 4:16 Min. • October 30th, 2025
Nehmen Sie ein bakterielles Lysat, das hydrophile Proteine, Lipoproteine und Proteinaggregate enthält.
Fügen Sie ein kaltes, nichtionisches Reinigungsmittel hinzu, das bei wärmeren Temperaturen eine Phasentrennung ermöglicht.
Auf Eis inkubieren und regelmäßig mischen. Das Detergens bindet an den Lipidanteil des Lipoproteins und bildet Protein-Detergens-Komplexe.
Erwärmen Sie die Mischung, um eine Phasentrennung zu induzieren. Lipoproteine konzentrieren sich in der detergenden Phase, während hydrophile Proteine in der wässrigen Phase verbleiben.
Bei Raumtemperatur zentrifugieren, um die zweiphasige Trennung aufrechtzuerhalten.
Entsorgen Sie die wässrige Phase, fügen Sie der Waschmittelphase einen kalten Puffer hinzu und mischen Sie.
Wiederholen Sie den Kühl-, Erwärmungs- und Zentrifugationszyklus, um Lipoproteine anzureichern.
Fügen Sie dann kalten Puffer hinzu und zentrifugieren Sie bei niedriger Temperatur, um die Nicht-Lipoprotein-Aggregate zu pelletieren.
Der Überstand wird in ein Röhrchen mit einem proteinfällenden Lösungsmittel überführt und bei Minustemperaturen inkubiert, um Lipoproteine auszufällen.
Bei Raumtemperatur zentrifugieren und den Überstand verwerfen.
Die gefällten Lipoprot
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