Selektive Aufreinigung eines bakteriellen Proteins durch negative Ionenaustauschchromatographie

Beginnen Sie mit einer Ionenaustauscherharzlösung, die positiv geladene funktionelle Gruppen für die selektive Proteinbindung enthält.

Nehmen Sie als Nächstes einen Proteinextrakt, der aus Wirtsbakterienzellen gewonnen wird, die so verändert wurden, dass sie einen Virulenzfaktor des pathogenen Bakteriums Helicobacter pylori überexprimieren.

Der Extrakt enthält den Zielvirulenzfaktor zusammen mit Wirtszellproteinen in einem Puffer bei pH 8.

Mischen Sie den Proteinextrakt mit dem Harz und inkubieren Sie ihn unter Rühren, um eine gleichmäßige Protein-Harz-Wechselwirkung zu gewährleisten.

Wirtsproteine, deren isoelektrische Punkte niedriger als der pH-Wert des Puffers sind, werden negativ geladen und binden an das positiv geladene Harz.

Das Zielprotein mit einem isoelektrischen Punkt nahe dem pH-Wert des Puffers bleibt weitgehend ungeladen und bleibt ungebunden.

Übertragen Sie die Protein-Harz-Aufschlämmung in eine Chromatographiesäule und lassen Sie das Harz absetzen.

Sammeln Sie die flüssige Phase, die das ungebundene Zielprotein enthält.

Spülen Sie das Harz mit dem Puffer ab, um eine maximale Rückgewinnung des Zielproteins zu gewährleisten.

Zur Herstellung von 15 Millilitern DEAE-Harz suspen