Eine Technik zur Herstellung einer monoklonalen Bakterienkultur

Beginnen Sie mit einer Bakterienkultur und führen Sie eine serielle Verdünnung durch, um die Zelldichte zu reduzieren.

Nehmen Sie ein kleines Aliquot der endgültigen Verdünnung und tupfen Sie es auf eine Agarplatte.

Fügen Sie sterile Glasperlen hinzu und schütteln Sie die Platte vorsichtig, um eine räumliche Trennung der Zellen zu gewährleisten, die für die Erzielung gut isolierter Kolonien unerlässlich ist.

Entfernen Sie die Glasperlen, drehen Sie die Platte um und inkubieren Sie.

Einzelne Zellen vermehren sich und bilden separate Kolonien, wodurch eine monoklonale Kultur entsteht, in der jede Kolonie aus einer genetisch einheitlichen Bakterienpopulation besteht.

Entnehmen Sie einzelne Kolonien und füllen Sie sie in separate Röhrchen mit einem flüssigen Medium um.

Inkubieren Sie die Röhrchen unter Rühren. Beurteilen Sie nach der Inkubation die Trübung jeder Kultur.

Im Medium suspendierte Bakterienzellen streuen das Licht, wodurch die Kulturen mit zunehmender Zelldichte trüber erscheinen.

Wählen Sie das Röhrchen mit der höchsten Trübung, das die dichteste monoklonale Bakterienpopulation anzeigt, für Downstream-Anwendungen.

Beschriften Sie die drei Flaschen, die mit 100 Millilitern LB Lennox Bouillon vorbereitet sind, mit den Nummern eins, zwei und drei.

Pipettieren Sie 0,1 Milliliter der resultierenden Bakterienkultur in die erste Flasche. Verschließen Sie die Flasche und schwenken Sie sie eine Minute lang mit der Hand, um eine homogene Lösung zu erhalten. Pipettieren Sie anschließend 0,1 Milliliter von Flasche Nummer eins in Flasche Nummer zwei. Verschließen Sie die Flasche wieder und schwingen Sie sie eine Minute lang mit der Hand. Führen Sie die letzte Verdünnung durch, indem Sie 0,1 Milliliter aus der Flasche Nummer zwei in die Flasche Nummer drei pipettieren. Verschließen Sie die Flasche und schütteln Sie sie eine Minute lang mit der Hand.

Und dann pipettieren Sie 20 Mikroliter der Lösung auf jede der vier Petrischale. Legen Sie dann vier autoklavierte Glasperlen mit einem Durchmesser von drei Millimetern in jede der Petrischale. Schließen Sie die Deckel der Petrischalen und schütteln Sie sie eine Minute lang mit der Hand.

Wenn Sie fertig sind, drehen Sie die Petrischalen auf den Kopf und inkubieren Sie die Platten in einem 37 Grad Celsius heißen Inkubator für 24 Stunden.

Wählen Sie mit einem Edelstahlspatel die resultierenden monoklonalen Bakterien aus den vier Petrischalen aus und geben Sie sie in die restlichen sieben Röhrchen mit 12,5 Millilitern LB Lennox Brühe. Lassen Sie die Röhrchen 24 Stunden lang im 37 Grad Celsius heißen Inkubator und wählen Sie dann mit der visuellen kolorimetrischen Methode die Röhre mit der größten Lichtstreuung aus.