Eine Technik zur Herstellung einer monoklonalen Bakterienkultur

Beginnen Sie mit einer Bakterienkultur und führen Sie eine serielle Verdünnung durch, um die Zelldichte zu reduzieren.

Nehmen Sie ein kleines Aliquot der endgültigen Verdünnung und tupfen Sie es auf eine Agarplatte.

Fügen Sie sterile Glasperlen hinzu und schütteln Sie die Platte vorsichtig, um eine räumliche Trennung der Zellen zu gewährleisten, die für die Erzielung gut isolierter Kolonien unerlässlich ist.

Entfernen Sie die Glasperlen, drehen Sie die Platte um und inkubieren Sie.

Einzelne Zellen vermehren sich und bilden separate Kolonien, wodurch eine monoklonale Kultur entsteht, in der jede Kolonie aus einer genetisch einheitlichen Bakterienpopulation besteht.

Entnehmen Sie einzelne Kolonien und füllen Sie sie in separate Röhrchen mit einem flüssigen Medium um.

Inkubieren Sie die Röhrchen unter Rühren. Beurteilen Sie nach der Inkubation die Trübung jeder Kultur.

Im Medium suspendierte Bakterienzellen streuen das Licht, wodurch die Kulturen mit zunehmender Zelldichte trüber erscheinen.

Wählen Sie das Röhrchen mit der höchsten Trübung, das die dichteste monoklonale Bakterienpopulation anzeigt, für Downstream-Anwendungen.

Beschriften Sie die drei Flaschen, die mit 100 Millilitern LB Lennox