Herstellung und aerosolbasierte Ablagerung von Bacillus subtilis-Sporen

Beginnen Sie mit einer Kultur von Bacillus subtilis, einem sehr widerstandsfähigen sporenbildenden Bakterium.

Die Kultur wird in ein nährstoffbegrenztes Medium geimpft und mit Belüftung inkubiert, um die Sporulation zu induzieren.

Sporulierende Zellen produzieren ruhende Sporen mit Schutzschichten.

Übertragen Sie die Kultur in ein Röhrchen und zentrifugieren Sie, um die Sporen zu pelletieren. Entfernen Sie den Überstand mit den Zell- und Schmutzresten.

Waschen Sie das Pellet mit sterilem destilliertem Wasser, wiederholen Sie die Zentrifugation und resuspendieren Sie die Sporen in sterilem Wasser.

Bestätigen Sie mit einem Phasenkontrastmikroskop die Reinheit der Sporen, indem Sie helle Sporen identifizieren und die Abwesenheit von Verunreinigungen überprüfen.

Führen Sie serielle Verdünnungen der Sporen durch, legen Sie eine Platte auf den Nähragar und inkubieren Sie sie, um die Keimung lebensfähiger Sporen in Kolonien zu ermöglichen. Zählen Sie die Völker, um die Sporenkonzentration zu bestimmen.

Basierend auf dieser Konzentration passen Sie die Sporenmenge an und laden Sie die verdünnte Probe in eine Aerosoldüse. Sprühen Sie es auf eine sterile Glasoberfläche, wo die Suspension schnell tr