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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 3:37 Min. • October 30th, 2025
Nehmen Sie eine Lactococcus lactis-Kultur , die die membrangebundene Peptidase NisP exprimiert.
Mischen Sie die Kultur mit einem nährstoffreichen Medium.
Geschmolzenen Agar hinzufügen, mischen und in einen Teller gießen, um L. lactis gleichmäßig im Agar zu verteilen.
Sobald sie erstarrt sind, stanzen Sie Vertiefungen in den Agar.
Nehmen Sie als nächstes rekombinante E. coli , die Wildtyp- oder modifizierte Vorläufervarianten des antimikrobiellen Peptids Nisin produzieren.
Zentrifugieren Sie, um die Bakterien zu pelletieren, verwerfen Sie die Überstände und resuspendieren Sie die Pellets in Puffer.
Beschallen Sie, um die Bakterien zu lysieren, zentrifugieren Sie und übertragen Sie die Überstände in frische Röhrchen.
Normalisieren Sie die Lysate mit Hilfe von Puffern auf die gleiche optische Dichte, um konsistente Peptidspiegel zu gewährleisten.
Pipettieren Sie jede Probe in einzelne Agar-Vertiefungen und inkubieren Sie die Proben.
Während der Inkubation diffundieren die Nisin-Vorläuferpeptide in den Agar und werden von NisP gespalten, wodurch reifes Nisin entsteht.
Reifes Nisin hemmt das Wachstum von L. lactis und bildet klare Halos um das Bohrloch.
Vergleichen Sie die Halo-Größen, um die anti
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