Metallbegrenzter bakterieller Wachstumsassay zur Untersuchung der Rolle von metallresponsiven Genen

0 Aufrufe • 2:24 Min. • October 30th, 2025

Nehmen wir Wildtyp-Bakterien und mutierte Bakterien, denen ein spezifisches metallresponsives Gen fehlt, das im Wildtyp vorhanden ist.

Die Bakterien werden in metallarmen Medien gezüchtet, um ihre internen Metallreserven zu erschöpfen.

In dieser metallarmen Umgebung wird das metallresponsive Gen in Wildtyp-Bakterien aktiviert und exprimiert einen Oberflächenrezeptor, der in mutierten Bakterien nicht vorhanden ist.

Verdünnen Sie die Kulturen, um eine gleichmäßige Zelldichte zu gewährleisten.

Nehmen Sie eine Multiwell-Platte, die einen Metall-Protein-Komplex enthält.

Geben Sie die verdünnten Kulturen in die Vertiefungen.

Inkubieren Sie die Platte in einem Plattenlesegerät, das unter Schütteln bei kontrollierter Temperatur gehalten wird, um ein optimales Bakterienwachstum zu fördern.

Messen Sie die Absorption in regelmäßigen Abständen, um das Bakterienwachstum im Laufe der Zeit zu überwachen.

Bei Wildtyp-Bakterien ermöglicht der Metallrezeptor die Extraktion des Metallions aus dem Komplex und unterstützt so dessen Wachstum.

Mutierte Bakterien zeigen ein eingeschränktes Wachstum, da sie das Metallion ohne die Metallrezeptoren nicht aus dem Komplex extrahieren können.

Geben Sie 10 Mikroliter 10X

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