JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologie
0 Ansichten • 2:51 Min. • October 30th, 2025
Beginnen Sie mit einem nicht typisierbaren Haemophilus influenzae-Stamm , einem menschlichen Erreger der Atemwege.
Streichen Sie die Bakterienkultur auf nährstoffreiche Selektivmedien und inkubieren Sie sie unter CO2 -angereicherten Bedingungen, um die Umgebung der Atemwege nachzuahmen.
Während der Inkubation verwerten die Bakterien Nährstoffe und vermehren sich und bilden Kolonien.
Übertragen Sie eine Kolonie in selektive flüssige Medien und inkubieren Sie, um das Bakterienwachstum in der Flüssigkultur zu fördern.
Übertragen Sie ein Aliquot in ein Mikrozentrifugenröhrchen.
Zentrifugieren Sie, um die Bakterien zu trennen und den Überstand zu entsorgen.
Die Bakterien werden in einem Puffer resuspendiert, erneut zentrifugiert, um die Bakterien zu waschen und zu trennen, und der medienhaltige Überstand wird entsorgt.
Die Bakterien im Puffer resuspendieren und verdünnen.
Messen Sie mit einem Spektralphotometer die optische Dichte bei 600 nm, um die Bakterienkonzentration abzuschätzen.
Die verdünnte Bakterienkultur auf selektive Medien auffüllen und inkubieren, um Kolonien zu bilden.
Zählen Sie die Kolonien, um koloniebildende Einheiten für die Vorbereitung des Inokulums für die zukünftige Verwendung zu berechnen.
Den NTHI auf einer Schokoladen-Agar-Platte anrichten. Inkubieren Sie die Platte über Nacht kopfüber bei 37 Grad Celsius mit 5 % Kohlendioxid. Am nächsten Tag kultivieren Sie die Bakterien in einer Gehirn-Herz-Infusionsbrühe.
Geben Sie dann in ein Mikrozentrifugenröhrchen einen Milliliter der Brühe. Schleudere die Mischung bei 4.000 g fünf Minuten lang bei Raumtemperatur herunter. Entsorgen Sie dann den Überstand und suspendieren Sie das Pellet in einem Milliliter PBS. Wiederholen Sie diesen Waschschritt noch einmal.
Als nächstes verdünnen Sie 100 Mikroliter resuspendierte Lösung in 900 Mikrolitern PBS und messen Sie die Absorption der Kultur bei 600 Nanometern. Verwenden Sie diese Informationen, um das Inokulum auf 20 Millionen KBE pro Milliliter einzustellen.
Bestimmen Sie als Nächstes die Lebensfähigkeit und die KBE des Inokulums. Kulturieren Sie ein bis zehn serielle Verdünnungen der Brühe auf Schokoladen-Agar-Platten und inkubieren Sie die Platten über Nacht.