Synthese von Nanodisc-stabilisierten Membranprotein-Antigenen mit einem zellfreien System

Nehmen wir ein bakterielles zellfreies System, das keine intakten Zellstrukturen aufweist, aber die molekularen Komponenten beibehält, die für die In-vitro-Transkription und -Translation erforderlich sind.

Einführung von Plasmiden, die für das Membranprotein-Antigen und das Gerüstprotein kodieren, zusammen mit synthetischen Phospholipiden und Polymeren.

Ergänzen Sie die Mischung mit ATP, GTP und einer Aminosäuremischung, um die Proteinsynthese zu initiieren.

Bereiten Sie gleichzeitig eine mit der Aminosäuremischung angereicherte Futterlösung vor.

Laden Sie das Gemisch in die innere Kammer und die Futterlösung in die äußere Kammer eines Dialysegeräts mit zwei Kammern.

Während der Inkubation diffundieren die Substrate durch die semipermeable Membran von der äußeren in die innere Kammer und erleichtern so die Plasmidtranskription und die Proteintranslation.

Das Gerüstprotein baut die Phospholipide und Polymere zu Lipid-Nanoscheiben auf und erleichtert die Faltung und den Einbau von MPA in diese Strukturen.

Nebenprodukte, die während der Reaktion entstehen, diffundieren in die äußere Kammer, wodurch optimale Bedingungen für die Nanodisc-stabilisierte MPA-Bildung aufrechterhalten werden.

Bereit