Western Blot zur Beurteilung der strukturellen Integrität eines bakteriellen Impfstoffantigens

Nehmen Sie ein SDS-PAGE-Gel, das Proteinbanden aus Membranprotein-Nanolipoprotein-Partikeln enthält. Diese Komplexe tragen das Chlamydien oligomere Membranprotein (MP), ein vielversprechendes Impfstoffantigen gegen Chlamydien-Infektionen .

Verwenden Sie als Kontrolle Proteinbanden aus gereinigtem oligomerem MP.

Montieren Sie das Gel, die Western-Blot-Membran und die Blotting-Komponenten in einem Dry-Blotting-System.

Anlegen eines elektrischen Stroms, um die aufgelösten Proteine auf die Membran zu übertragen.

Entfernen Sie die Membran und inkubieren Sie sie in einem Puffer, der Detergenzien und Primärantikörper enthält.

Die Detergenzien blockieren unspezifische Interaktionsstellen, während die primären Antikörper auf das MP abzielen.

Waschen Sie die Membran, um ungebundene Primärantikörper zu entfernen.

Inkubieren Sie mit Fluorophor-konjugierten Sekundärantikörpern, die auf die Primärantikörper abzielen.

Waschen Sie die Membran, um überschüssige Sekundärantikörper zu entfernen.

Nehmen Sie Fluoreszenzbilder der Membran auf.

Molekulare Banden, die mit dem oligomeren MP der Kontrolle übereinstimmen, bestätigen die strukturelle Integrität des MP innerhalb der Komplexe und unterstützen sein antige