Präparation und Umwandlung von Bakterien mittels Hochspannungs-Elektroporation

Beginnen Sie mit einem Röhrchen mit Bakterien, die in ein Nährmedium geimpft werden.

Inkubieren Sie unter Schütteln, bis die Zellen die aktive Teilungsphase erreichen.

Zentrifugieren Sie, um die Zellen zu sammeln und den Überstand zu entsorgen.

Waschen Sie die Zellen wiederholt mit eiskaltem Glycerin, um Salze zu entfernen, und resuspendieren Sie es in Glycerin, um die Lebensfähigkeit der Zellen zu erhalten.

Bereiten Sie ein Plasmid vor, das ein Antibiotikaresistenzgen enthält, in sterilem Wasser mit EDTA, um den DNA-Abbau zu verhindern.

Mischen Sie die Plasmidlösung mit den Bakterienzellen.

Wenden Sie einen kurzen Hochspannungsimpuls an, um vorübergehend Poren in der Bakterienmembran zu schaffen.

Dadurch kann die Plasmid-DNA in das Zytoplasma gelangen.

Übertragen Sie die Zellen sofort in ein Rückgewinnungsmedium und inkubieren Sie sie unter Schütteln.

Die Bestandteile des Mediums unterstützen die Membranreparatur und die Genexpression von Plasmid-kodierten Antibiotikaresistenzen.

Verteilen Sie die Zellen auf Nähragar, der das Antibiotikum enthält, und inkubieren Sie, bis sich Kolonien bilden.

Wähle eine einzelne Kolonie aus und streiche sie auf einen frischen Teller, um die Transformanten zu