JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologie
0 Ansichten • 2:15 Min. • September 26th, 2025
Plastoglobuli sind lipidreiche Tröpfchen im Zytoplasma von Cyanobakterien.
Sie speichern neutrale Lipide in einem hydrophoben Kern, der von einer amphipathischen Lipid-Monoschicht mit eingebetteten strukturellen und enzymatischen Proteinen umgeben ist. Die gespeicherten Lipide werden bei Stress mobilisiert, um die Zellfunktionen zu unterstützen.
Um sie zu isolieren, beginnen Sie mit einer rohen Plastoglobuli-Fraktion, die aus Cyanobakterien gewonnen wird. Diese Fraktion ist mit Plastoglobuli angereichert und enthält einige Restkontaminantenproteine.
Mischen Sie diese Fraktion mit einer dichteren Saccharoselösung und geben Sie sie in ein Ultrazentrifugenröhrchen.
Mit einer leichteren Saccharoselösung überlagern, um einen diskontinuierlichen Dichtegradienten zu erzeugen.
Zentrifugieren Sie mit hoher Geschwindigkeit unter kalten Bedingungen, um eine thermische Degradation der Plastoglobuli zu verhindern.
Der Gradient trennt die Komponenten nach Dichte: Lipidreiche Plastoglobuli mit geringer Dichte schwimmen nach oben, während dichtere, proteinreiche Verunreinigungen absinken.
Sammeln Sie die gereinigten Plastoglobuli und frieren Sie sie in einem Gefriermedium schockein, um ihre Struktur zu erhalten.
Für den Langzeitgebrauch bei extrem niedrigen Temperaturen lagern.
Um reine Plastoglobuli aus Cyanobakterien zu gewinnen, erstellen Sie, wie bereits erwähnt, einen Saccharosegradienten mit 500 Mikrolitern der rohen Plastoglobuli, 750 Mikrolitern des Mediums R 0,7 und 750 Mikrolitern des Mediums R 0,2. Nach der Zentrifugation die reinen Plastoglobuli in einem 1,5-Milliliter-Röhrchen sammeln und die reinen Plastoglobuli aliquotieren. Sobald dies erledigt ist, frieren Sie die reinen Plastoglobuli aliquot in flüssigem Stickstoff ein und lagern Sie sie direkt bei minus 80 Grad Celsius oder lyophilisieren Sie zu einem trockenen Pulver.