Quantifizierung der Polarität und Dynamik einer Komponente des Sekretionssystems in Legionella pneumophila

Beginnen wir mit Legionella pneumophila, einem Atemwegserreger, der eine fluoreszenzmarkierte Komponente des Sekretionssystems exprimiert, die für eine Wirtsinfektion benötigt wird.

Um die Polarität dieser Komponenten zu quantifizieren, erfassen Sie Fluoreszenzbilder und passen Sie den Kontrast an, um einzelne Zellen zu unterscheiden.

Platzieren Sie rechteckige Bereiche vom Zellpol in Richtung Zytoplasma, um Fluoreszenzgradienten zu messen.

Maskieren Sie diese Bereiche, um die mittlere Intensität und Varianz zu extrahieren, und berechnen Sie dann die Polaritätswerte als Verhältnis von Varianz zu mittlerer Intensität.

Hohe Polaritätswerte deuten auf eine gezielte Rekrutierung von Komponenten an den Bakterienpolen hin.

Nehmen Sie für dynamische Messungen zwei Zeitrafferbilder auf und passen Sie den Kontrast an, um die Zellen deutlich zu visualisieren.

Platzieren Sie quadratische Bereiche in der Zellmitte, um die zytosolische Fluoreszenz zu messen.

Maskieren Sie ganze Zellen, um Photobleaching zu korrigieren, und definieren Sie Hintergrundbereiche zwischen Zellen für die Rauschsubtraktion.

Exportieren Sie alle Intensitäten und berechnen Sie die Änderung der Fluoreszenz im Laufe der Zeit.

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