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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:48 Min. • October 30th, 2025
Nehmen Sie ein Röhrchen mit einer Kultur von Vibrio natriegens, einem schnell wachsenden Bakterium.
Zentrifugieren Sie die Kultur, um die Bakterien zu pelletieren. Entsorgen Sie den Überstand mit den Medienresten.
Das Bakterienpellet wird in einem frischen Medium resuspendiert und in einen konischen Kolben überführt, der das gleiche Medium für die Zubereitung der Bakterienkultur enthält.
Inkubieren Sie die Kultur durch Schütteln unter belüfteten Bedingungen.
Aufgrund der kurzen Generationszeit verwertet Vibrio natriegens Nährstoffe und teilt sich schnell, um eine konzentrierte Bakterienpopulation zu erzeugen.
Überwachen Sie mit einem Spektralphotometer regelmäßig die optische Dichte (OD), um die Bakterienkonzentration zu bestimmen.
Wachsen Sie die Kultur, bis der OD etwa eins erreicht, was auf eine exponentielle Wachstumsphase mit hoher Stoffwechselaktivität hinweist.
Übertragen Sie die Kultur in Zentrifugenröhrchen.
Zentrifugieren Sie bei niedriger Temperatur, um die Bakterien zu trennen und gleichzeitig die zelluläre Integrität zu erhalten.
Stellen Sie das Röhrchen auf Eis und entfernen Sie den Überstand mit Zelltrümmern.
Lagern Sie das Bakterienpellet bei extrem niedrigen Temperaturen für die nachgelagerte Analyse.
Waschen Sie zunächst einen Milliliter der Vibrio natriegens-Kultur über Nacht, indem Sie sie eine Minute lang in einer Tischzentrifuge bei 10.600 g zentrifugieren.
Der Überstand wird aspiriert, ohne das Pellet zu stören, und in einem Milliliter frischem LB-V2-Medium resuspendiert. Ein Milliliter gewaschene Übernachtkultur wird in einem autoklavierten 4-Liter-Erlenmeyerkolben mit sterilem Deckel in einen Liter frisches LB-V2-Wachstumsmedium eingeimpft, um ein Verdünnungsverhältnis von eins zu tausend zu erreichen. Züchten Sie die Kultur bei 30 Grad Celsius und schütteln Sie sie bei 225 U/min.
Verwenden Sie ein Spektralphotometer, um den OD 600 der Kultur zu überwachen, und wenn er 1,0 plus oder minus 0,2 erreicht, ernten Sie die Kultur, indem Sie sie in zwei 500-Milliliter-Röhrchen bei 3.500 g für 20 Minuten bei vier Grad Celsius zentrifugieren und dann auf Eis legen. Saugen Sie den Überstand an und verarbeiten Sie das Pellet sofort.