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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 3:58 Min. • October 30th, 2025
Nehmen Sie eine Suspension von Vibrio natriegens, die eine hohe Proteinsyntheserate aufweist, in einem gekühlten Puffer ein, um den Zellabbau zu verhindern.
Unter kalten Bedingungen zentrifugieren.
Entsorgen Sie den Überstand, um Verunreinigungen zu entfernen.
Suspendieren Sie das Pellet in einer kleinen Menge gekühltem Puffer.
Übertragen Sie die Suspension mit einer Spitze mit breiter Bohrung in ein Mikrozentrifugenröhrchen, um ein mechanisches Scheren zu verhindern.
Mischen Sie die Suspension und legen Sie den Schlauch in eine Halterung, die auf Eis steht.
Senken Sie die Spitze des Ultraschallgeräts in die Aufhängung ab.
Initiieren Sie die Beschallung, um die Zellmembran zu stören und zytoplasmatische Inhalte freizusetzen.
Zentrifuge, um die unlöslichen Zelltrümmer zu trennen.
Den Überstand oder Rohzellextrakt mit zytoplasmatischem Inhalt in ein frisches Röhrchen geben.
Den Zellextrakt in flüssigem Stickstoff schockfrosten, um seine Bioaktivität zu erhalten.
Bei extrem niedrigen Temperaturen lagern, um sie weiter in der zellfreien Proteinexpression zu verwenden.
Kühlen Sie den frisch zubereiteten S30-Lysepuffer bei einem pH-Wert von 7,7 auf etwa vier Grad Celsius ab. Verwenden Sie 10 Millili
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