Zellfreie Proteinexpression unter Verwendung eines bakteriellen Rohzellextrakts
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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 3:32 Min. • October 30th, 2025
Ein zellfreies Proteinexpressionssystem verwendet ein bakterielles Rohzelllysat, das die molekulare Maschinerie enthält, die für die In-vitro-Transkription und -Translation unerlässlich ist.
Dieses Lysat enthält Transkriptionsfaktoren, Ribosomen und Transfer-RNAs (tRNAs).
Fügen Sie dem Lysat eine Mischung hinzu, die eine DNA-Vorlage, die RNA-Polymerase, Nukleotide und Aminosäuren enthält.
Übertragen Sie es auf eine PCR-Platte und zentrifugieren Sie, um die Flüssigkeit aufzufangen, die an den Wänden haftet. Versiegeln Sie die Platte, um eine Verdunstung zu verhindern.
Inkubieren Sie in einem Thermocycler bei optimaler Temperatur, um die zellfreie Proteinexpression zu unterstützen.
Der Transkriptionsfaktor assoziiert sich mit der RNA-Polymerase und bildet einen Komplex, der an die Matrizen-DNA bindet.
Dieser Komplex katalysiert die RNA-Synthese und integriert Nukleotide, um eine Boten-RNA (mRNA) zu erzeugen.
Die mRNA rekrutiert Ribosomen, die die Translation initiieren, während der tRNAs die entsprechenden Aminosäuren liefern, um eine Polypeptidkette zu bilden.
Das Polypeptid faltet sich zu einem funktionellen Protein, das für nachgelagerte Anwendungen bereit ist.
Um eine zellfreie Proteinexp
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