JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 4:37 Min. • October 30th, 2025
Nehmen Sie eine Kultur von Phormidium lacuna, einem filamentösen Cyanobakterium.
Homogenisieren Sie die Kultur, um die Filamente zu dispergieren, und zentrifugieren Sie dann, um die Bakterien zu pelletieren.
Entsorgen Sie den Überstand und suspendieren Sie das Pellet in nährstoffreichen Medien.
Geben Sie Plasmid-DNA, die grün fluoreszierendes Protein und Antibiotikaresistenzgene enthält, auf eine mit Antibiotika ergänzte Agarplatte.
Geben Sie die Bakteriensuspension über die DNA und inkubieren Sie sie unter Lichtbedingungen.
Die Bakterien verinnerlichen die DNA mit Hilfe von Typ-IV-Pili. Die eingeführten Gene integrieren sich in eine der mehrfachen Kopien des bakteriellen Genoms.
Verteilen Sie die Bakterien auf eine mit Antibiotika ergänzte Agarplatte, um die transformierten Bakterien auszuwählen.
Identifizieren Sie unter einem Lichtmikroskop gesunde, grüne Filamente, die auf eine erfolgreiche Transformation hinweisen.
Übertragen Sie die ausgewählten Filamente auf flüssige Medien mit einer höheren Antibiotikakonzentration, um die transformierte Population anzureichern.
Auch hier werden sie auf Agar mit höheren Antibiotikagehalten aufgetragen, um die Transformanten zu trennen.
Visualisieren S
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos