Gleitmotilität in Phormidium-Lacuna-Filamenten

Beginnen Sie mit einer Kultur von Phormidium-Lacuna-Filamenten .

Homogenisieren Sie die Kultur kurz, um Filamentcluster aufzubrechen und eine gleichmäßige Suspension zu erzeugen.

Übertragen Sie die homogenisierte Probe auf eine Petriplatte und lassen Sie sie ruhen.

Decken Sie die Platte mit Zellophan ab, um die Verdunstung zu reduzieren.

Legen Sie einen Objektträger auf den Mikroskoptisch, der als Stützplattform dient.

Positionieren Sie die Platte mit der Probe direkt auf dem Objektträger.

Verwenden Sie ein Objektiv mit geringer Leistung und fokussieren Sie sich auf die im Medium schwebenden Bakterienfilamente, um ihre Bewegung zu beobachten.

Die Filamente zeigen eine langsame, gleitende Bewegung über die Oberfläche, angetrieben von Typ IV Pili - den mikroskopisch kleinen Fasern, die an der inneren Membran zusammengesetzt sind und durch die äußere Membran austreten.

Diese Fasern dehnen sich aus und wieder zusammen, um die Zellen nach vorne zu ziehen und ihnen das Gleiten zu ermöglichen.

Dieser Assay zeigt die charakteristische Gleitmotilität von Phormidium lacuna in einer flüssigen Umgebung.

Kultivieren Sie P. lacuna in F2-Medium unter 50 U/min horizontaler Bewegung in weißem Licht für etwa fünf Tage, bis die geschätzte optische Dichte bei 750 Nanometern 0,35 beträgt. Lagern Sie die Probe bei vier Grad Celsius. Homogenisieren Sie die Filamente eine Minute lang mit Ultraschall bei maximaler Leistung und Zyklus von eins.

Messen Sie die optische Dichte bei 750 Nanometern und geben Sie acht Milliliter des Mediums, das P. lacuna enthält, in eine sechs Zentimeter große Petrischale. Warten Sie einige Minuten, bis die Probe Raumtemperatur erreicht hat, und decken Sie dann die Petrischale mit Zellophanfolie ab. Legen Sie einen Objektträger mit einer Kamera auf den X-Y-Tisch eines Standardmikroskops.

Schalten Sie das Mikroskoplicht ein und bewegen Sie ein 4X- oder 10X-Objektiv in den Weg des Lichts. Stellen Sie dann die Petrischale auf den Objektträger. Passen Sie einzelne Filamente oder Filamentbündel durch die X-, Y- und Z-Bewegungen der Tabelle an.

Beobachten Sie die Bewegungen einzelner Filamente oder Bündel und zeichnen Sie die Bewegungen mit einer handelsüblichen Mikroskopkamera auf. Stellen Sie sicher, dass die Objektivlinse die Flüssigkeit nicht berührt.