Name: Modeling Stroke in Mice - Middle Zerebralarterie mit dem Filament-Modell (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-01-06T17:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 28 s
Description: Erfahren Sie die Filament-Technik zur Okklusion der Arteria cerebri media bei Mäusen für Schlaganfallforschung. Diese Methode ermöglicht reproduzierbare Hirninfarkte und neurologische Defizite zur Untersuchung ischämischer Schäden.

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Diese Arbeit wurde von der Europäischen Gemeinschaft Siebten Rahmenprogramms (FP7/2007-2013) unter Finanzhilfevereinbarung Nr. 201024 und Nr. 202213 (European Stroke Network) finanziert. Zusätzliche Mittel wurden vom Bundesministerium für Bildung und Forschung (Centrum für Schlaganfall-Forschung Berlin) und die Deutsche Forschungsgemeinschaft (Exzellenzcluster NeuroCure) gegeben. Die Autoren bedanken sich bei Mareike Thielke (Dep. für Experimentelle Neurologie, Charité Berlin) für die Unterstützung danken während der Operation und Elke Ludwig (Charité Video Services) für die Herstellung der Animation.

Um eine hohe Qualität und Reproduzierbarkeit, empfehlen wir die Verwendung von Standard Operating Procedures (SOP). In diesem Video werden veröffentlicht SOPs als entwickelt und in unserem Labor angewandt. 1 1. Middle Zerebralarterie <ol><li> Mäuse sind betäubt mit einem entsprechenden Betäubungsmittel Regime in Rücksprache mit Tierärzten. (ZB Induktion mit 1,5 bis 2% Isofluran und Wartung mit 1,0 bis 1,5% Isofluran in 2 / 3 N2O und 1 / 3 O2 mit einem Verdampfer). <ol><li> Die Körpertemperatur der Mäuse ist mit 36,5 ° C ± 0,5 ° C während der Operation mit einer Heizplatte gehalten. Ein Feedback-kontrollierte Heizkissen, die nach der rektalen Temperatur der Maus erwärmt, wird dringend empfohlen. </li><li> Desinfizieren Sie die Haut und die umliegenden Fell mit einem geeigneten Mittel (zB 70% Ethylalkohol) und trocknen Sie ihn danach. </li></ol></li><li> Eine Mittellinie Hals Schnitt gemacht und die Weichteile sind auseinander gezogen. </li><li> Die linke Arteria carotis communis (LCCA) wird vorsichtig frei präpariert aus den umliegenden Nerven (ohne Schädigung der Vagus-Nerv) und einer Ligatur erfolgt über 6.0/7.0 String. 5,0 String kann auch verwendet werden. </li><li> Die linke A. carotis externa (LECA) wird dann abgetrennt und ein zweiter Knoten gemacht wird. </li><li> Als nächstes wird die linke A. carotis interna (LICA) isoliert und ein Knoten ist mit einem 6,0 Wendel vorbereitet. </li><li> Nach Erhalt einer guten Ansicht der linken Arteria carotis interna (LICA) und die linke pterygopalatina Arterie (LPA), sind beide Arterien abgeschnitten, mit einem mikrovaskulären Clips. </li><li> Ein kleines Loch ist in der LCCA geschnitten, bevor sie an die LECA und die LICA gabelt. Ein Monofilament von 8,0-Nylon mit Silizium-Härter-Gemisch (siehe unten) beschichtet wird dann in den LICA eingeführt, bis es an den Clip anhält. Ist darauf zu achten nicht auf die A. occipitalis einzugeben. (Abbildung 1) </li><li> Der abgeschnittene Arterien sind geöffnet, während das Filament in die LICA eingeführt wird, um die Herkunft der LMCA in den Kreis der Willis verschließen. </li><li> Der dritte Knoten auf der LICA geschlossen wird, um das Filament in Position zu fixieren. </li><li> Die Mäuse erhalten Kochsalzlösung 0,5 ml subkutan als Volumen Nachschub. Zur Schmerzlinderung ist Lidocain-Gel topisch in die Wunde aufgetragen. </li><li> Wenn Reperfusion soll, Mäuse für 30 bleiben - 90 min Okklusion in einem beheizten Käfig, konnte die Wunde mit einer kleinen Naht-Clip verschlossen werden. Danach eine zweite Betäubung durchgeführt wird, ist der dritte Knoten auf der ICA momentanen geöffnet und der Faden zurückgezogen. </li><li> Die restlichen Nähte werden verkürzt und die Haut mit einer chirurgischen Naht adaptiert. </li><li> Alle Tiere erhalten einen zweiten Band Nachschub wie oben beschrieben. </li><li> Die Tiere werden in einem beheizten Käfig für zwei Stunden gesetzt, um die Körpertemperatur zu kontrollieren. <ol><li> Die Tiere müssen täglich nach der Operation für Anzeichen von Beschwerden überprüft werden. Die Mäuse konnten zeigen einige postoperative Gewichtsabnahme. Sie erhalten pürierte Nahrung in einer Petrischale auf den Boden zu ermutigen, zu essen gegeben. Das Essen wird täglich für sieben Tage ersetzt. </li></ol></li></ol> 2. Sham Betrieb <ol><li> Für Schein-Operationen der Faden eingelegt, um LMCA verschließen und sofort Instant Reperfusion (1,8) ermöglichen zurückgezogen. Die anschließende Operation ist identisch mit der auf die Tiere unterzogen zerebrale Ischämie (1,9-1,14) durchgeführt, einschließlich einer zweiten Narkose. </li></ol> 3. Vorbereitung der Filament <ol><li> Die Sterilität der Faden sollte in Betracht gezogen werden. Die Verwendung von sterilisierten Geräten sowie eine angemessene Behandlung des Filaments danach ist eine Voraussetzung für eine sterile Operation. Desinfektion des Filaments ist schwierig, da viele der gängigen Sterilisationsverfahren, die Qualität des Fadens verschlimmern kann. Allerdings Methoden wie Strahlung, zum Beispiel mit UV-Licht oder γ-Strahlen oder chemische Sterilisation, z. B. mit hoch reaktiven Gasen wie Ethylenoxid, anwendbar sind. </li><li> 8,0 Nylonfaden ist in Längen von 11 mm unter dem Mikroskop geschnitten </li><li> Das Filament Spitze muss vollständig und gleichmäßig über eine Länge von 8 mm beschichtet werden mit einem Härter Mischung aus Xantopren M Mucosa und Activator NF Optosil </li></ol> 4. Repräsentative Ergebnisse Je nach Dauer des Blutflusses Einschränkung, verschiedene Motor-und Verhaltenswissenschaften Defizite führen. Sowohl nach 30 und 60 min von zerebraler Ischämie, Tiere in den meisten Fällen zeigen verringerte Widerstand gegen seitliche push und kreisenden aufgrund von Störungen in Fortbewegung. Milder Läsionen manifestieren als flexor Position in der vorderen limbs. Diese leicht zu beobachtenden Anzeichen kann als ein grundlegendes Ergebnis für den Erfolg der Operation verwendet. 2. Morphologisch der Läsion kann unter Verwendung entweder Histologie oder Magnetic Resonance Imaging (MRI) werden. Sechzig Minuten Verschluss der mittleren Hirnarterie produziert Gewebe pannecrosis in einem Gebiet, darunter sowohl das Striatum und dem Neokortex, während 30 Minuten der Ischämie hauptsächlich neuronalen Zelltod begrenzt auf das Striatum verursachen. 3 (Abbildung 2) In Bezug auf Infarktvolumen erwarten wir, dass einer Standardabweichung von weniger als 30% in eine Reihe von Operationen. Die Sterblichkeit ist abhängig von der Okklusion Zeit mit rund 5% nach 30 min der Ischämie und 10 bis 20% nach 60 min. Ein weiterer minimal invasive Möglichkeit ist der Einsatz von Laser-Doppler-Flussmessung (LDF) während der Operation, die eine direkte Kontrolle über seinen Erfolg ermöglicht. In einem einzelnen Tier, Reduktion auf 10 bis 20% der preocclusion Werte zeigt deutlich erfolgreicher Induktion fokaler zerebraler Ischämie 4 Allerdings LDF nicht als eine Methode für interindividuelle Vergleiche verwendet werden, da LDF nur messen kann quantitative Veränderungen (in Prozent) des Blutes. flow in einem kleinen und begrenzten Gewebeprobe Volumen. Es gibt keine Informationen über die räumliche Ausdehnung der verminderte Durchblutung. 5 Es gibt mehrere Tests, um Verhaltensweisen nach einem Schlaganfall zu beurteilen, einschließlich Ganganalyse 6,7, Rotarod 8, Pole-Test 9,10, Klebstoff Entfernung test 11,12, Treppenhaus-Test 13,14, Leitersprosse test 15,16 und Morris Water Maze 17. In all diesen Tests, Mäuse unterzogen MCAo weniger erfolgreich als die Kontrolltiere durchzuführen. <img src="/files/ftp_upload/2423/2423fig1.jpg" alt="Abbildung 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 1"> Abbildung 1. Scheme des Schiffes Architektur der hirnversorgenden (dargestellt im Hintergrund) in der Maus. Verschiedene Stämme können Abweichungen zeigen, zum Beispiel die A. occipitalis manchmal Blätter aus der Arteria carotis interna. <img src="/files/ftp_upload/2423/2423fig2.jpg" alt="Abbildung 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 2"> Abbildung 2. Schematische Darstellung des typischen Läsion Größen nach verschiedenen Zeitpunkten der Reperfusion in der proximalen MCAo Modell. In der Mitte sind die typischen Verlauf der funktionellen Aktivität und der zerebralen Durchblutung nach MCAo dargestellt. (MCAo: Middle Zerebralarterie, LDF: Laser-Doppler-Messung)

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<li>Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bench+to+bedside%3A+the+quest+for+quality+in+experimental+stroke+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Bench to bedside: the quest for quality in experimental stroke research.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 26, 1465-1478 (2006).</li>
<li>Macleod, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Good+laboratory+practice%3A+preventing+introduction+of+bias+at+the+bench%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Good laboratory practice: preventing introduction of bias at the bench.</a> Stroke. 40, 50-52 (2009).</li>
<li>Group, S. T. A. I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+for+standards+regarding+preclinical+neuroprotective+and+restorative+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Recommendations for standards regarding preclinical neuroprotective and restorative drug development.</a> Stroke. 30, 2752-2758 (1999).</li>
</ol>

Tierversuche wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien und Vorschriften her, indem Landesamt fuer Gesundheit und Soziales, Berlin, Deutschland gesetzt durchgeführt.

Das Modell der transienten, proximalen MCA-Okklusion 18,19 hier vorgestellten imitiert eine der häufigsten Arten von ischämischen Schlaganfällen bei Patienten. 20 Basierend auf variable Reperfusion mal, das Modell verschiedene Sorten von Schäden von transitorische ischämische Attacke (TIA), große Angebote Infarkte darunter große Teile der ischämischen Hemisphäre. Dies ermöglicht dem Forscher zu verschiedenen pathophysiologischen Mechanismen Studie nach einem Schlaganfall. 20,21 Die Operation kann in kurzer Zeit durchgeführt werden und produziert mit einer hohen reproduzierbaren Läsionen. Dennoch ist dies eine gründliche Kontrolle von Störfaktoren erfordert. 22 Kleine Unterschiede in der Bedienung Technik kann für unterschiedliche Auswirkungen auf die Infarkt-Konto. 23,24 Außerdem ist es aufgrund Varianzen in zerebrale vaskuläre Anatomie, zeigen verschiedene Mausstämme ein anderes Ergebnis. 25,26 Körper Temperatur wirkt sich neurologische Schäden, mit Hypothermie führt zu kleineren Läsionen 27 und Hyperthermie zu schweren Defiziten. 28 Folglich Temperaturregelung und Wartung ist sehr relevant in diesem Modell. 29 Darüber hinaus, Blutdruck und Blutgase wichtige Confounder des Ergebnisses werden und müssen überwacht werden. 30,31 Der Einsatz von schnellen und minimal invasive Methoden (nicht-invasive Blutdruckmessung, geeignete und leicht zugängliche Blutentnahme Sites) wird empfohlen. Die Wahl der Anästhesie ist auch sehr wichtig, da einige neuroprotektive Effekte haben können, und / oder Vasodilatatoren, wie zB Isofluran. 32 Daher sollte die Exposition auf die Anästhesie so kurz wie möglich und genormt. Wir schließen Tiere, die operiert wurden länger als 15 min. Rasieren der chirurgischen Stelle produziert microabrasions und Entzündung und löst Haar-Fragmente. Dies kann weiter erhöhen Entzündungen und fördern lokale Infektion, die auf Schlaganfall Pathophysiologie auswirken können. Wohnverhältnisse, insbesondere die Verwendung von Bereicherung, kann sich auf Schlaganfall Ergebnis und sollten standardisiert und beschrieben in Research-Berichten. 6,33,34 Die Nutzung von Umweltressourcen Bereicherung und ihre Auswirkung auf die Reproduzierbarkeit ist eine Frage der Diskussion. 35 Ein weiterer wichtiger Confounder ist die Schlaganfall induziert Infektionsrisiko vor allem nach längeren Zeiten der Ischämie 36, was zu zusätzlichen Morbidität und erhöhter Mortalität führt. 37,38 Da Infektionen werden bei rund Tag 3 bis 5 symptomatisch, hat dies wichtige Konsequenzen für die langfristige Follow-up in solche Modelle. Um zu Ergebnissen führen, die für die Entwicklung neuartiger Behandlungsmöglichkeiten für Schlaganfall, Standardisierung und Qualitätskontrolle ist sehr wichtig in der präklinischen Translational Stroke Research 39 &quot;Good Laboratory Practice&quot; 40,41 Mandate.: <ol><li> eine angemessene und detaillierte Beschreibung der verwendeten Tiere; </li><li> Berechnung der Stichprobengröße und die Berichterstattung über den erwarteten Effekt Größe; </li><li> Ein-und Ausschlusskriterien, die vor der Studie festgelegt; </li><li> Randomisierung der Aufteilung in Gruppen; </li><li> Zuteilungsverdeckung in Bezug auf die Ermittler; </li><li> Berichterstattung Tiere aus der Analyse ausgeschlossen; </li><li> geblendet Bewertung der Ergebnisse; </li><li> Berichterstattung potentielle Interessenkonflikte und Studienfinanzierung. </li></ol>

<table><tbody><tr><td>Chirurgische Schere (für Hautschnitt)</td><td>Fine Science Tools</td><td>14028-10</td><td></td></tr><tr><td>2 Dumont-Pinzetten (medizinisch #5, gerade Spitze)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11253-20</td><td></td></tr><tr><td>Federschere (nach Vannas)</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-00</td><td></td></tr><tr><td>Zangeneinsatz für Mikroklemmen</td><td>Fine Science Tools</td><td>00072-14</td><td></td></tr><tr><td>Mikrovaskuläre Klemme (z. B. S&amp;amp;G B1-V)</td><td>Fine Science Tools</td><td>00396-01</td><td>Auch Serrefine möglich</td></tr><tr><td>2 Hämostasieklammern nach Hartmann</td><td>Fine Science Tools</td><td>13002-10</td><td></td></tr><tr><td>Nadelhalter (nach Olsen-Hegar oder ähnlich)</td><td>Fine Science Tools</td><td>12002-14</td><td></td></tr><tr><td>Standard anatomische Pinzette (für Wundverschluss)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11000-12</td><td></td></tr><tr><td>5/0 Nahtmaterial</td><td>Suprama</td><td></td><td>für vaskuläre Ligaturen</td></tr><tr><td>6/0 Nahtmaterial</td><td>Suprama</td><td></td><td>für Hautnaht, 5/0 ebenfalls möglich</td></tr><tr><td>Lidocain (z. B. Xylocain Gel 2 %)</td><td>AstraZeneca</td><td></td><td>oder andere lokale Schmerztherapie</td></tr><tr><td>Operationsmikroskop (Stereomikroskop), Vergrößerung 6x bis max. 40x</td><td>Leica Zeiss</td><td>MZ6 Stemi2000C</td><td></td></tr><tr><td>Kaltlichtquelle</td><td>Leica Microsystems</td><td>KL1500</td><td></td></tr><tr><td>Temperaturgeführtes Heizkissen-System</td><td>Fine Science Tools</td><td>21052-00</td><td>Mit Mauspad und kleiner Sonde</td></tr><tr><td>Anästhesiesystem für Isofluran</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Abott</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Veterinär-Aufwachkammer</td><td>Peco Services</td><td>V1200</td><td>Beheizter Käfig</td></tr><tr><td>8,0 Nylonfilament</td><td>Suprama</td><td>TEL181005</td><td>zum Beschichten</td></tr><tr><td>Skalpell</td><td></td><td></td><td>Zum Zerschneiden des Filaments</td></tr><tr><td>Lineal</td><td></td><td></td><td>Zum Abschneiden der korrekten Filamentlänge</td></tr><tr><td>Xantopren M Mucosa</td><td>Heraeus Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Activator Universal Plus</td><td>Heraeus Instruments</td><td></td><td>Optosil - Xantopren</td></tr><tr><td>2 Dumont-Pinzetten (medizinisch #5, gerade Spitze)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11253-20</td><td></td></tr><tr><td>Weiche Unterlage zum Lagern und Greifen der unbeschichteten Filamente</td><td></td><td></td><td>z. B. Tupfer, Schaumstoff, &amp;#8230;</td></tr><tr><td>Behälter für neu hergestellte Filamente</td><td></td><td></td><td>z. B. Petrischale, flexibler Schaumstoff, &amp;#8230;</td></tr></tbody></table>

modeling stroke in mice - middle zerebralarterie mit dem filament-modell

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Der Schlaganfall ist eine der häufigsten Ursachen für Tod und Invalidität bei Erwachsenen, vor allem in den hoch entwickelten Ländern. Allerdings sind die Behandlungsmöglichkeiten bisher sehr begrenzt. Um den Bedarf an neuen Therapieansätzen, experimentellen Schlaganfall-Forschung häufig beschäftigt Nagermodellen fokaler zerebraler Ischämie. Die meisten Forscher nutzen dauerhafte oder vorübergehende Okklusion der mittleren zerebralen Arterie (MCA) in Mäusen oder Ratten. Proximalen Verschluss der mittleren Hirnarterie (MCA) über die intraluminale Nahttechnik (so genannte Filament oder Faden-Modell) ist wahrscheinlich die am häufigsten verwendete Modell in der experimentellen Schlaganfall-Forschung. Die intraluminale MCAO Modell bietet den Vorteil der Induktion reproduzierbare vorübergehende oder dauerhafte Ischämie der MCA Gebiet in einer relativ nicht-invasive Art und Weise. Intraluminale Ansätze unterbrechen die Durchblutung des gesamten Territoriums von dieser Arterie. Filament Okklusion damit Verhaftungen flow proximal des lenticulo-gestreifte Arterien, die den Basalganglien zu versorgen. Filament Verschluss der MCA Ergebnisse in reproduzierbaren Läsionen im Kortex und Striatum und kann entweder dauerhaft oder vorübergehend. Im Gegensatz dazu Modellen induzieren distalen (an der Verzweigung der lenticulo-gestreifte Arterien) MCA-Okklusion in der Regel ersparen das Striatum und in erster Linie um den Neocortex. Darüber hinaus sind diese Modelle erfordern Kraniektomie. In das Modell in diesem Artikel gezeigt, ist ein Silizium-beschichteten Faden, der in der Arteria carotis communis eingeführt und entlang der A. carotis interna in den Kreis der Willis, wo es blockiert den Ursprung der Arteria cerebri media. Bei Patienten, sind Verschlüsse der A. cerebri media zu den häufigsten Ursachen für einen ischämischen Schlaganfall. Da unterschiedliche ischämische Abständen frei in diesem Modell gewählt werden, je nach Zeitpunkt der Reperfusion, ischämische Läsionen, die mit unterschiedlichen Schweregraden hergestellt werden können. Reperfusion durch Entfernen der Okklusion Filament zumindest teilweise Modelle der Wiederherstellung der Durchblutung nach spontaner oder therapeutischer (tPA) Lyse einer thromboembolischen Blutgerinnsel in den Menschen. In diesem Video stellen wir Ihnen die grundlegende Technik sowie die wichtigsten Fallstricke und Störfaktoren, die den prädiktiven Wert dieses Modells beschränken können.

Filamentous Verschluss der mittleren Hirnarterie ist ein gemeinsames Modell für die Untersuchung einen ischämischen Schlaganfall bei Mäusen.

Modeling Stroke in Mice - Middle Zerebralarterie mit dem Filament-Modell

Schlaganfälle gehören zu den häufigsten Todesursachen und Gründen für Erwerbsunfähigkeit bei Erwachsenen, insbesondere in hoch entwickelten Ländern. Die bisherigen Behandlungsoptionen sind jedoch ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, ein Mausmodell einer fokalen zerebralen Ischämie zu erzeugen, indem die Arteria cerebri media mit einem intraluminalen Faden blockiert wird. Dies wird erreicht, indem ein medianer Halschnitt angelegt und die Arteria carotis communis freigelegt wird. Im nächsten Schritt werden Ligaturen um die Arteria carotis communis gelegt, und Klammern an der Arteria carotis externa werden verwendet, um diese an Ort und Stelle zu halten und Blutungen zu verhindern.Der letzte Schritt des Verfahrens besteht darin, den Filament in die Arteria cerebri media einzuführen. Dadurch wird der Zweig der mittleren Hirnarterie blockiert, was letztendlich zu neurologischen Defiziten führt. Als Folge davon kann eine Okklusion durch die Beobachtung von Verhaltensänderungen erkannt werden.Ein wesentlicher Vorteil der proximalen MCA-Okklusion mittels Fadenmethode besteht darin, dass sie hochgradig reproduzierbare Läsionen im Striatum und im Kortex ermöglicht. Die Ischämie kann dauerhaft oder vorübergehend induziert werden, und da keine Kraniotomie erforderlich ist, gilt die fadenbasierte MCA-Okklusion als mehr oder weniger minimalinvasiv. Im Allgemeinen haben Personen, die neu in diese Methode sind, aufgrund der empfindlichen Natur mikrochirurgischer Techniken Schwierigkeiten. Bereiten Sie vor dem Eingriff den Faden vor, indem Sie einen 8,0-Nylonfaden unter dem Mikroskop in 11 Millimeter lange Stücke schneiden.Die Filamentspitze muss über eine Länge von acht Millimetern vollständig und gleichmäßig mit einer Silikonmischung beschichtet werden; für optimale Ergebnisse wird die Anwendung standardisierter Arbeitsanleitungen empfohlen. Die Art der verwendeten Maus hängt vom Ziel der Studie ab. Im Allgemeinen sollten die Mäuse älter als 10 Wochen sein.Verwenden Sie geeignete Anästhetika in Absprache mit dem Tierarztteam. Die Körpertemperatur der Mäuse wird während der Operation mit einer Heizplatte auf etwa 36,5 Grad Celsius gehalten; bereiten Sie die Operationsstelle vor, desinfizieren Sie die Haut und das umgebende Fell und lassen Sie es trocknen. Führen Sie einen medianen Schnitt entlang des Halses durch und ziehen Sie das Weichgewebe vorsichtig auseinander.Die linke Arteria carotis communis wird vorsichtig freigelegt und von den umgebenden Nervenstrukturen gelöst, wobei der Nervus vagus geschont wird; anschließend wird eine Ligatur mit einer Nahtstärke von 5,0 bis 7,0 angelegt. Danach wird die linke Arteria carotis externa isoliert und ein zweiter Knoten gelegt. Nach der lockeren Isolierung der linken Arteria carotis interna wird ein Knoten um diese gelegt.Unter Verwendung eines 6,0-Filaments wird der Knoten später im Verfahren festgezogen. Nachdem eine gute Sicht auf die linke Arteria carotis interna und die linke Arteria palatina tegmentalis erzielt wurde, werden beide Arterien mit einer extrakraniellen Klammer verschlossen, um sie für die Einführung des Filaments vorzubereiten. Ein kleines Loch wird in die Arteria carotis communis geschnitten, bevor diese sich gabelt.Der zuvor hergestellte Monofilamentfaden wird anschließend in die Arterie eingeführt. Die abgeklemmten Arterien werden geöffnet, während das Filament in die Arteria carotis interna eingeführt wird. Um die Arteria cerebri media zu verschließen, wird der dritte Knoten an der Arteria carotis interna geschlossen.Um das Filament in Position zu fixieren, anschließend Lidocain-Gel topisch auf die Wunde zur Schmerzlinderung auftragen. Bei Scheinoperationen wird das Filament eingeführt und sofort wieder zurückgezogen, um eine sofortige Reperfusion zu ermöglichen, und 0,5 Milliliter physiologische Kochsalzlösung subkutan als Volumenersatz verabreicht. Um die Effekte der Reperfusion zu untersuchen, den dritten Knoten öffnen und das Filament entfernen.Ein bestimmter Zeitraum nach der Ischämie, gewöhnlich nach 30 bis 60 Minuten. In diesem Beispiel wird die Reperfusion 60 Minuten nach der Okklusion zugelassen, anschließend wird eine zweite Volumenersatzspritze mit Kochsalzlösung verabreicht. Schließlich verkürzen Sie die verbleibenden Nähte und verschließen die Haut mit einer chirurgischen Naht.Stellen Sie die Tiere nach der Operation für zwei Stunden in einen beheizten Käfig, um sich zu erholen. Überprüfen Sie die Tiere täglich auf Anzeichen von Unwohlsein. Nach der Operation kann Gewichtsverlust auftreten, und die Mäuse sollten mit zerkleinerter Nahrung versorgt werden, die in einer Petrischale auf dem Boden platziert wird, um das Fressen zu fördern.Das Futter wird sieben Tage lang täglich erneuert. Die Dauer der Durchblutungsbeschränkung kann zu Unterschieden in motorischen und verhaltensbezogenen Defiziten führen. Nach 30 oder 60 Minuten zerebraler Ischämie zeigen die meisten Tiere eine verminderte Widerstandsfähigkeit.Spätere Schub- und Kreisbewegungen aufgrund einer Störung der Fortbewegung, leichtere Läsionen zeigen sich als Flexorstellung in den Vordergliedmaßen. Diese leicht beobachtbaren Anzeichen können als grundlegende Bewertungsskala für den Erfolg der Operation verwendet werden. Die entstandene Läsion kann entweder mittels Histologie oder Magnetresonanztomographie beurteilt werden.Wie hier zu sehen ist, führt eine 60-minütige Okklusion der Arteria cerebri media zu einer pannekrotischen Gewebeschädigung in einem Bereich, der sowohl das Striatum als auch das umfasst, während eine 30-minütige Ischämie hauptsächlich den neuronalen Zelltod bewirkt, der auf das Striatum begrenzt ist. Gut ausgebildete MCAO-Chirurgen können diese Technik in 10 Minuten beherrschen. Bei der Durchführung dieses Verfahrens ist es wichtig, sich an die standardisierten Arbeitsanweisungen zu halten, um reproduzierbare Ergebnisse zu gewährleisten und Störgrößen zu kontrollieren.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Wir zeigen in dem Video ein Verfahren zur Herstellung einer mittleren Zerebralarterie in erwachsenen Mäusen mit einem intraluminalen Monofilament. Wir zeigen auch, wie man das Ausmaß der Hirninfarkt von 2,3,5-Triphenyltetrazoliumchlorid (TTC) Färbung zu bewerten.

Mouse Model of Middle Zerebralarterie

Die intraluminale Mitte Zerebralarterie (MCAO) Modell ist die häufigste verwendete Modell unter experimentellen Schlaganfall-Modellen. Hier zeigen wir Ihnen das gesamte Modell im Detail mit der Führung des Laser-Doppler-Flussmessung und seine repräsentative Ergebnisse.

Intraluminale Nahen Zerebralarterie (MCAO) Modell des ischämischen Schlaganfalls mit Laser-Doppler-Flussmessung Guidance in Mäuse

Dieses Video beschreibt das Verfahren zur Entwicklung eines transienten Schlaganfalls in einem Mausmodell unter Verwendung eines siliziumbeschichteten filamentbasierten Verschlusses der mittleren Hirnarterie. Das entwickelte Modell ahmt den menschlichen Schlaganfall nach und hilft so, neue therapeutische Strategien zur Behandlung von Schlaganfällen zu untersuchen.

Filamentinsertionsbasiertes transientes Schlaganfallmodell: Ein chirurgischer Eingriff zur Durchführung eines Verschlusses der mittleren Hirnarterie im Gehirn von Mäusen

Verschiedene Mausmodellen der mittleren Hirnarterie (MCAO) sind weit verbreitet in der experimentellen Hirnforschung. Hier zeigen wir das Modell der transkraniellen Dauer distalen MCAO, die im Einklang kortikalen Infarkt von einer Größe, die von der Mehrheit der menschlichen ischämische Schlaganfälle auferlegt Schaden produziert.

Modellierung Schlaganfall bei Mäusen: Permanent Koagulation der distalen A. cerebri media

Um die Pathophysiologie des Schlaganfalls zu verstehen, ist es wichtig, zuverlässige Modelle zu verwenden. Dieses Papier wird eine der am häufigsten verwendeten Taktmodelle bei Mäusen beschreiben, die Arteria cerebri media Okklusion (MCAo) Modell genannt (auch bezeichnet als die intraluminale Faden oder Naht Modell) mit Reperfusion.

Chirurgische Ansatz für Arteria cerebri media Occlusion und Reperfusion fokaler zerebraler Ischämie bei Mäusen

Schlaganfall ist ein globales Problem mit minimalen Behandlungsmöglichkeiten und keiner aktuellen klinischen Therapie zur Regeneration des verlorenen Hirngewebes. Hier beschreiben wir Methoden zur Erzeugung eines präzisen photothrombotischen Schlaganfalls im motorischen Kortex von Nagetieren und der anschließenden Injektion von Hydrogel-Biomaterialien, um ihre Auswirkungen auf die Geweberegeneration nach einem Schlaganfall zu untersuchen.

Injektion von Hydrogel-Biomaterialgerüsten in das Gehirn nach einem Schlaganfall

Verschiedene Modelle des mittleren Hirnarterienverschlusses (MCAo) werden in der experimentellen Schlaganfallforschung eingesetzt. Hier wird ein experimentelles Schlaganfallmodell der transienten MCAo über die Arteria carotis externa (ECA) beschrieben, das darauf abzielt, den menschlichen Schlaganfall nachzuahmen, bei dem der zerebrovaskuläre Thrombus aufgrund einer spontanen Gerinnsellyse oder -therapie entfernt wird.

Modellierung des Schlaganfalls bei Mäusen: Vorübergehender Verschluss der mittleren Hirnarterien über die Arteria carotis externa

Dieses Protokoll demonstriert ein einzigartiges Mausschlagmodell mit einem mittelgroßen Infarkt und einer ausgezeichneten Überlebensrate. Dieses Modell ermöglicht es präklinischen Schlaganfallforschern, die Dauer der Ischämie zu verlängern, gealterte Mäuse zu verwenden und langfristige funktionelle Ergebnisse zu bewerten.

Ein modifiziertes transkranielles Modell für den Verschluss der mittleren Hirnarterie zur Untersuchung von Schlaganfallergebnissen bei gealterten Mäusen

Dieses Protokoll beschreibt das Modell der transienten fokalen zerebralen Ischämie bei Mäusen durch intraluminalen Verschluss der mittleren Hirnarterie. Darüber hinaus werden Beispiele für die Ergebnisbewertung mit Hilfe von Magnetresonanztomographie und Verhaltenstests gezeigt.

Transienter mittlerer Hirnarterienverschluss Modell des Schlaganfalls

Dieses Protokoll beschreibt den Prozess der Vorbereitung auf die Reperfusion des Verschlusses der mittleren Hirnarterie über die Arteria carotis communis.

Eine modifizierte Modellpräparation für die Reperfusion des Verschlusses der mittleren Hirnarterie

Erfahren Sie die Filament-Technik zur Okklusion der Arteria cerebri media bei Mäusen für Schlaganfallforschung. Diese Methode ermöglicht reproduzierbare Hirninfarkte und neurologische Defizite zur Untersuchung ischämischer Schäden.

Modeling Stroke in Mice - Middle Zerebralarterie mit dem Filament-Modell

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