Modeling Stroke in Mice - Middle Zerebralarterie mit dem Filament-Modell

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, ein Mausmodell der fokalen zerebralen Ischämie zu erstellen, indem die mittlere Hirnarterie mit einem intraluminalen Faden blockiert wird. Dies wird erreicht, indem ein Schnitt in der Mittellinie des Halses vorgenommen und die Arteria carotis communis sichtbar gemacht wird. Der nächste Schritt besteht darin, Ligaturen um die Arteria carotis communis zu binden und die Klemmen der äußeren Halsschlagader zu verwenden, um sie an Ort und Stelle zu halten und Blutungen zu verhindern.

Der letzte Schritt des Verfahrens besteht darin, das Filament in den Kreis von Willis einzuführen. Dadurch wird der Ast der mittleren Hirnarterie blockiert, letztlich neurologische Ausfälle. Infolgedessen kann eine Okklusion durch die Beobachtung von Verhaltensänderungen identifiziert werden.

Einer der Hauptvorteile des proximalen MCA-Verschlusses über die Filamenttechnik besteht darin, dass er hochreproduzierbare Läsionen im Stratum und im Kortex bietet. Die Ischämie kann dauerhaft und vorübergehend angewendet werden, und da sie keine kraniektomie filamentös erfordert, kann der MCA-Verschluss als mehr oder weniger nicht-invasiv angesehen werden. Im Allgemeinen haben Personen, die mit dieser Methode noch nicht vertraut sind, aufgrund der heiklen Natur der mikrochirurgischen Techniken Schwierigkeiten Vor dem Eingriff bereiten Sie das Filament vor, indem Sie ein 8,0-Nylon-Filament unter dem Mikroskop in 11 Millimeter Länge schneiden.

Die Filamentspitze muss auf einer Länge von acht Millimetern vollständig und gleichmäßig mit einem Silikongemisch beschichtet werden, für optimale Ergebnisse empfiehlt sich die Anwendung von Standardarbeitsanweisungen. Welche Art von Maus verwendet wird, hängt vom Ziel der Studie ab. Im Allgemeinen sollten Mäuse älter als 10 Wochen sein.

Verwenden Sie geeignete Anästhetika in Absprache mit dem Tierarztpersonal. Die Körpertemperatur der Mäuse wird während der Operation mit einer Heizplatte auf etwa 36,5 Grad Celsius gehalten, die Operationsstelle vorbereitet, die Haut und das umliegende Fell desinfiziert und trocknen lassen. Machen Sie einen Schnitt in der Mittellinie entlang des Halses und ziehen Sie die Weichteile vorsichtig auseinander.

Die linke Halsschlagader wird sorgfältig präpariert, frei von den umgebenden Nerven, ohne den Vagusnerv zu schädigen, und eine Ligatur wird mit einer Naht von 5,0 bis 7,0 hergestellt. Isolieren Sie als Nächstes die linke äußere Halsschlagader und binden Sie einen zweiten Knoten. Nachdem Sie die linke Arteria carotis interna isoliert haben, binden Sie locker einen Knoten um sie.

Mit einem 6.0er Filament wird der Knoten später im Verfahren festgezogen. Nach einer guten Sicht auf die linke Arteria carotis interna und die linke Arteria tego palatin, beides Arterien, wurde EC abgeschnitten, um die Filamentinsertion vorzubereiten. In die Halsschlagader wird ein kleines Loch geschnitten, bevor sie sich gabelt.

Das zuvor hergestellte Monofilament wird dann in die Arterie eingeführt. Die abgeschnittenen Arterien werden geöffnet, während das Filament in die Arteria carotis interna eingeführt wird. Um die mittlere Hirnarterie zu verschließen, wird der dritte Knoten an der Arteria carotis interna geschlossen.

Um das Filament in Position zu bringen, tragen Sie dann Lidocain-Gel topisch auf die Wunde auf, um die Schmerzen zu lindern. Bei Scheinoperationen wird das Filament sofort eingeführt und zurückgezogen, um eine sofortige Reperfusion zu ermöglichen, und sofort zurückgezogen, um eine sofortige Reperfusion zu ermöglichen, wobei 0,5 Milliliter Kochsalzlösung subkutan als Volumenauffüllung verabreicht werden. Um die Auswirkungen der Reperfusion zu untersuchen, öffnen Sie den dritten Knoten und entfernen Sie das Filament.

Ein festgelegter Zeitraum nach der Ischämie, in der Regel nach 30 bis 60 Minuten. In diesem Beispiel ist eine Reperfusion 60 Minuten nach der Okklusionsillusion erlaubt, verabreichen Sie eine zweite volumenauffüllende Injektion von Kochsalzlösung. Zum Schluss kürzen Sie die restlichen Nähte und verschließen die Haut mit einer chirurgischen Naht.

Setzen Sie die Tiere für zwei Stunden in einen beheizten Käfig, um sich nach der Operation zu erholen, und untersuchen Sie die Tiere täglich auf Anzeichen von Beschwerden. Nach der Operation kann es zu Gewichtsverlust kommen, und Mäuse sollten mit püriertem Futter versorgt werden, das in einer Petrischale auf dem Boden platziert wird. Um das Essen zu fördern.

Das Futter wird sieben Tage lang täglich gewechselt. Die Dauer der Durchblutungseinschränkung kann zu Unterschieden in den motorischen und Verhaltensdefiziten führen. Nach 30 oder 60 Minuten zerebraler Ischämie zeigen die meisten Tiere eine verminderte Widerstandsfähigkeit.

S späteres Schieben und Zirkeln aufgrund einer Störung der Fortbewegung manifestieren sich mildere Läsionen als Beugestellung in den vorderen Gliedmaßen. Diese leicht beobachtbaren Anzeichen können als Grundnote für den Erfolg der Operation verwendet werden. Die resultierende Läsion kann entweder mit Hilfe der Histologie oder der Magnetresonanztomographie beurteilt werden.

Wie hier zu sehen ist, führt ein 60-minütiger Verschluss der mittleren Hirnarterie zu einer Gewebepan-Nekrose in einem Bereich, der sowohl das Striatum als auch das umfasst, während eine 30-minütige Ischämie hauptsächlich den neuronalen Zelltod verursacht, der auf das Striatum beschränkt ist. Gut ausgebildete MCAO-Chirurgen beherrschen diese Technik in 10 Minuten. Beim Versuch dieses Verfahrens ist es wichtig, daran zu denken, Standardarbeitsanweisungen zu befolgen, um reproduzierbare Ergebnisse zu gewährleisten und Störfaktoren zu kontrollieren.