Sauerstoffflussmessungen zur Bewertung der mitochondrialen Atmung in lebenden und permeabilisierten Zellen

Laden Sie eine Säugetierzellsuspension in Respirometerkammern, die Medien enthalten, und versiegeln Sie sie mit Stopfen, um ein geschlossenes System für die Sauerstoffmessung zu schaffen.

Ein Sensor in jeder Kammer misst in Echtzeit den Sauerstofffluss, die zelluläre Sauerstoffverbrauchsrate.

Injizieren Sie Digitonin durch die Stopper, um die Zellmembranen zu permeabilisieren, so dass zytosolische Komponenten nach außen diffundieren können.

Dies verringert die Substratverfügbarkeit für die mitochondriale Elektronentransportkette und senkt den Sauerstofffluss.

Führen Sie Pyruvat und Malat ein, die in die Mitochondrien eindringen und Elektronenträger erzeugen.

Diese Ladungsträger geben Elektronen an die Komplexe I und II des ETC ab, wodurch der Elektronentransfer eingeleitet und der Sauerstofffluss erhöht wird.

Injizieren Sie ADP, um die ATP-Synthese zu initiieren, die den Sauerstofffluss weiter erhöht.

Als nächstes titrieren Sie einen Entkoppler schrittweise, um den Protonengradienten zu unterbrechen und den Sauerstofffluss zu maximieren.

Zum Schluss injizieren Sie Antimycin A, um Komplex III zu hemmen, den Elektronentransport zu stoppen und den Sauerstofffluss zu minimieren.

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