Herstellung einer mikrofluidischen Platte mit bakteriellen Zellen

Nehmen wir eine mikrofluidische Platte, die Paare von Eingangs- und Ausgangsbohrlöchern enthält, die durch mikrofluidische Kanäle verbunden sind, darunter serpentinische Kanäle und einen experimentellen Kanal.

Um die Kanäle zu grundieren, füge Medien gut zum Ausgang hinzu.

Stellen Sie die Platte in eine Plattenstufe und versiegeln Sie sie mit einer sterilisierten Abdeckung.

Aktivieren Sie den Medienfluss vom Ausgangsschacht zum Eingangsschacht, um alle eingeschlossenen Lufttaschen in den Kanälen auszuspülen.

Nimm den Teller ab. Entsorge das Restmedium aus dem Ausgangsschacht und gib eine Bakterienkultur hinzu.

Fügen Sie dem Eingangsbrunnen frisches Material hinzu, um einen Luftrückfluss zu verhindern. Stell die Platte zurück in die Bühne.

Während Sie unter dem Mikroskop beobachten, nehmen Sie den Fluss wieder auf, um Zellen in den experimentellen Kanal zu ziehen.

Passen Sie die Durchflussmenge an, um den Eindringen der Zellen in die Schlangenkanäle zu vermeiden und eine Verstopfung zu vermeiden.

Stoppen Sie den Fluss und inkubieren Sie, um die bakterielle Anhaftung zu erleichtern.

Entfernen Sie die Platte und entsorgen Sie die restliche Bakterienkultur und das Medium.

Die Bakterien innerhalb der mikrofluidischen Platte sind nun bereit für weitere Experimente.

Für das Grundieren entferne zuerst die 48-Well-Mikrofluidikplatte aus der Verpackung, ohne die Glasoberfläche am unteren Rand der Platte zu berühren, und reinige den Glasverschluss am Boden der Platte mit einem Linsengewebe. Um die mikrofluidischen Kanäle zu grunden, pipettieren Sie 200 Mikroliter Minimalmedium mit 37 Grad Celsius in den Ausgangsbrunnen und achten Sie darauf, Blasen zu vermeiden. Dann leg die Platte auf die Plattenstufe.

Wischen Sie die Grenzfläche mit Ethanol ab und versiegeln Sie sie auf der Plattenstufe, sobald das Ethanol getrocknet ist. Im manuellen Modus am Steuermodul stellen Sie die Flüssigkeit als Luria-Bertani-Brühe auf 37 Grad Celsius ein und die maximale Sheer auf fünf Dyn pro Quadratzentimeter. Klicken Sie auf die Ausgangswellen, um den Fluss vom Ausgang zum Eingangsschacht zu aktivieren und die Kanäle zu starten.

Nach fünf Minuten wird der Fluss unterbrochen, um die Aussaat vorzubereiten, und den Teller vorsichtig von der Bühne entfernt. Dann wird ein Restmedium aus dem Ausgangsbrunnen aspiriert, ohne ein Medium aus dem inneren Kreis zu entfernen, der zu den mikrofluidischen Kanälen führt. Um die experimentellen Kanäle zu säen, geben Sie 300 Mikroliter Minimalmedium in den Eingangsbrunnen und geben anschließend 300 Mikroliter Bakterienkultur in den Ausgangsbrunnen.

Bringen Sie die Platte zurück in die Bildaufnahmephase, wobei Sie die Schnittstelle vor dem Auftragen mit Ethanol abwischen, und nutzen Sie den Live-Kamerafeed, um auf einen einzelnen Kanal zu fokussieren. Während Sie den Live-Feed visuell überwachen, nehmen Sie den Fluss mit 1 bis 2 Dyn pro Quadratzentimeter für etwa 2 bis 4 Sekunden fort, damit die Zellen in den experimentellen Kanal, aber nicht in die serpentinischen Kanäle, gelangen können, und lassen Sie die Platte eine Stunde lang auf der temperaturkontrollierten Stufe stehen, damit die Zellen sich anschließen können. Am Ende der Anbringungsphase wird die Platte vorsichtig aus der Stufe entfernt und die Bakterien aus dem Ausgangsbrunnen abgesaugt, ohne den Kanal zu stören.

Dann verwenden Sie eine neue Pipettenspitze, um das Medium aus den Eingangsmulden zu entfernen.