JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:28 Min. • November 28th, 2025
Nehmen Sie eine Arabidopsis-Pflanze mit Blättern, die mit Bakterien vorgeimpft sind, um die Interaktionen zwischen Pflanze und Mikroben zu untersuchen.
Diese Bakterien vermehren sich im Apoplasten, dem interzellulären Raum zwischen Pflanzenzellen, und bilden Mikrokolonien.
Sobald die apoplastische Besiedlung etabliert ist, entfernen Sie die Blätter und legen Sie sie in eine nadellose Spritze.
Gib destilliertes Wasser dazu, um das Gewebe zu bedecken.
Setzen Sie den Kolben ein, halten Sie die Spritze aufrecht, tippen Sie darauf und stellen Sie den Kolben ein, um die eingeschlossene Luft freizulassen.
Versiegeln Sie die Spitze mit Parafilm, um eine geschlossene Kammer für die Apoplast-Extraktion zu schaffen.
Üben Sie positiven Druck aus, indem Sie den Kolben drücken, bis das Gewebe dunkel wird, was auf Kompression und Wassereintritt in die interzellulären Räume hinweist, um Bakterien zu lösen.
Als Nächstes üben Sie einen Unterdruck aus, indem Sie den Kolben ziehen, um die Gewebematrix zu erweitern und Flüssigkeit sowie Bakterien herauszuziehen.
Wiederholen Sie die Druckzyklen, um Scherkräfte zu erzeugen, die Mikrokolonien stören und Bakterien freisetzen, ohne das Pflanzengewebe zu schädigen.
Entdichten Sie die Spritze und sammeln Sie die apoplastische Flüssigkeit mit dispergierten Bakterien zur weiteren Analyse.
Vier Tage nach der Impfung schneiden Sie entweder den Luftteil der Arabidopsis-Pflanze oder das geimpfte Blatt der Bohnenpflanze ab und geben Sie es ohne Nadel in eine 20-Milliliter-Spritze.
Bei Bohnenblättern rollt man das Blatt auf sich selbst, wobei die abaxiale Fläche nach außen bleibt. Füge genug destilliertes Wasser hinzu, um das Gewebe zu bedecken. Dann stecken Sie den Kolben mit der Spritze in eine aufrechte Position und entfernen Sie die überschüssigen Luft- und Luftblasen in der Spritze, indem Sie sanft auf den Lauf klopfen, bis die gesamte Luft in der Nähe der Spitze liegt, und nach dem Entfernen der Luft die Spitze des Spritzenrohrs mit Paraffinfilm abdecken.
Drücken Sie nun vorsichtig den Kolben, um einen positiven Druck zu erzeugen, bis das Gewebe dunkler wird. Dann zieht man den Kolben, um einen Unterdruck zu erzeugen. Entfernen Sie den Paraffinfilm und den Kolben und sammeln Sie die Flüssigkeit, die die vom Apoplasten extrahierten Bakterien enthält.