Extraktion apoplastischer Bakterien mit einer spritzenbasierten Druckmethode

Nehmen Sie eine Arabidopsis-Pflanze mit Blättern, die mit Bakterien vorgeimpft sind, um die Interaktionen zwischen Pflanze und Mikroben zu untersuchen.

Diese Bakterien vermehren sich im Apoplasten, dem interzellulären Raum zwischen Pflanzenzellen, und bilden Mikrokolonien.

Sobald die apoplastische Besiedlung etabliert ist, entfernen Sie die Blätter und legen Sie sie in eine nadellose Spritze.

Gib destilliertes Wasser dazu, um das Gewebe zu bedecken.

Setzen Sie den Kolben ein, halten Sie die Spritze aufrecht, tippen Sie darauf und stellen Sie den Kolben ein, um die eingeschlossene Luft freizulassen.

Versiegeln Sie die Spitze mit Parafilm, um eine geschlossene Kammer für die Apoplast-Extraktion zu schaffen.

Üben Sie positiven Druck aus, indem Sie den Kolben drücken, bis das Gewebe dunkel wird, was auf Kompression und Wassereintritt in die interzellulären Räume hinweist, um Bakterien zu lösen.

Als Nächstes üben Sie einen Unterdruck aus, indem Sie den Kolben ziehen, um die Gewebematrix zu erweitern und Flüssigkeit sowie Bakterien herauszuziehen.

Wiederholen Sie die Druckzyklen, um Scherkräfte zu erzeugen, die Mikrokolonien stören und Bakterien freisetzen, ohne das Pflanzengewebe zu schädigen.

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