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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:27 Min. • November 28th, 2025
Nehmen wir separate Kulturen von Vibrio cholerae, einem pathogenen Bakterium, das drei verschiedene Biotypen enthält: klassische, Wildtyp-El Tor- und El-Tor-Variante, die jeweils genetisch unterschiedliche Untergruppen repräsentieren.
Inokulieren Sie jede Kultur in Röhren, die mit einem speziellen Medium gefüllt sind, um den Voges-Proskauer-(VP)-Test durchzuführen.
Inkubieren Sie mit Schütteln, um die Bakterienvermehrung zu fördern.
Der Wildtyp-El Tor fermentiert Glukose im Medium und produziert Acetoin, während klassische und variante Biotypen dies nicht tun.
Als Nächstes geben Sie α-Naphthol und Kaliumhydroxid zu jeder Tube, mischen Sie gründlich und inkubieren.
In Anwesenheit von Kaliumhydroxid katalysiert atmosphärischer Sauerstoff die Oxidation von Acetoin zu Diacetyl.
Diacetyl reagiert mit Verbindungen, die Guanidingruppen im Medium enthalten, und bildet ein rosa-rot gefärbtes Produkt, dessen Intensität durch α-Naphthol verstärkt wird.
Die Farbentwicklung zeigt eine positive VP-Reaktion, die für den Wildtyp-El Tor-Biotyp charakteristisch ist, während die klassischen und varianten Biotypen keine Farbbildung zeigen.
Inokulieren Sie 4 Milliliter Methylrote Voges-Proskauer- oder MR-VP-Brühe, indem Sie 10 Mikroliter zuvor über Nacht vorbereitete Kultur in 4 Milliliter MR-VP-Brühe in einem sterilen Kulturröhrchen pipettieren und mit Belüftung in einem Shaker-Inkubator bei 225 U/min für 12–16 Stunden bei 37 Grad Celsius inkubieren. Als Nächstes fügen Sie 150 Mikroliter 5 % Gewicht pro Volumen Alpha-Naphthol und 50 Mikroliter 40 % Gewicht pro Volumen Kaliumhydroxid zu 1 Milliliter Aliquot der MR-VP-Übernachtkultur in sterilen Kulturröhrchen hinzu.
Dann die Röhren kurz vortexen. Lassen Sie die Tuben bis zu vier Stunden bei Zimmertemperatur stehen, bis sich eine Farbveränderung entwickelt.