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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 3:09 Min. • November 28th, 2025
Nehmen Sie eine genetisch veränderte E. coli-Kultur , die ein chromosomales Tetracyclin-Operator-(tetO)-Array exprimiert.
Die Bakterien tragen außerdem ein Plasmid mit einem arabinose-induzierbaren Promotor, der die Expression des YFP-markierten Tetracyclin-Repressorproteins antreibt.
Die Kultur wird in ein angereichertes Nährmedium mit Antibiotika übertragen und durch Schütteln inkubiert, um plasmidführende Zellen auszuwählen.
Während die Zellen wachsen, bilden sich Replisome und initiieren die Replikation der chromosomalen DNA.
In der exponentiellen Phase wird ein Teil als uninduzierte Kontrolle aufgenommen.
Fügen Sie der verbleibenden Kultur Arabinose, einen Induktor, hinzu und inkubieren Sie beide Kulturen mit Schütteln.
In der nicht induzierten Kultur bleibt das AraC-Dimer an die DNA-Schleife gebunden und hemmt die Expression des Repressors.
In der induzierten Kultur bindet sich Arabinose an den AraC-Dimer und induziert so die Expression des Repressors.
Die Repressorproteine binden an das chromosomale TetO-Array und stoppen so den Fortschreiten der Replikationsgabel.
Verwenden Sie eine Fluoreszenzmikroskopie, um beide Kulturen zu beobachten.
Fluoreszierende Brennpunkte in der induzierte
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