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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:48 Min. • November 28th, 2025
Nehmen Sie eine Mastermischung, die eine strängverdrängende DNA-Polymerase, Nukleotide und einen doppelsträngigen DNA-bindenden Farbstoff für eine schleifenvermittelte isotherme Amplifikation oder LAMP enthält.
Fügen Sie Primer hinzu, die eine umgekehrt komplementäre Sequenz enthalten, die spezifisch für das Ziel-Bakteriengen ist.
Verteilt den Mastermix in die Röhren.
Füge Proben mit bakterieller DNA-Vorlagen zu den Röhrchen hinzu.
Setze die Röhren in ein LAMPEN-Instrument.
Die anfängliche Denaturierung ermöglicht es dem Primer, an die Ziel-DNA zu binden.
Wenn die strängverdrängende DNA-Polymerase beginnt, einen neuen Strang zu synthetisieren, verdrängt sie den bestehenden Strang, wodurch ein thermischer Kreislauf überflüssig wird.
Das verstärkte Produkt bildet aufgrund der umgekehrt komplementären Paarung eine Schleifenstruktur.
Diese Struktur enthält mehrere Startstellen für den nächsten Zyklus, was die exponentielle Amplifikation der Ziel-DNA ermöglicht.
Der Farbstoff bindet an die amplifizierte DNA und strahlt Fluoreszenz aus.
Überwachen Sie die Fluoreszenz in Echtzeit, um das Vorhandensein des Zielbakteriengens in den Proben zu erkennen.
Trennen Sie die Bereiche, die zur Herstellung des
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