Elektroporationsbasierte Abgabe fluoreszierender Biomoleküle in Bakterienzellen

Beginnen Sie mit einer gekühlten Cuvette, die eine Suspension elektrokompetenter Bakterienzellen enthält, die eine erhöhte Anfälligkeit für Membranpermeabilisierung haben.

Die Suspension enthält außerdem Biomoleküle, die mit organischen Fluorophoren markiert sind.

Führen Sie einen Hochspannungs-Elektroimpuls an, um temporäre Membranporen zu erzeugen, die den Eintritt in das Zytoplasma ermöglichen.

Gib ein nährstoffreiches Medium hinzu und übertrage die Zellen in ein Rohr. Inkubieren, um die Membranreparatur zu fördern.

Zentrifugiere die Zellen und entsorge dann den Supernatant mit nicht internalisierten Biomolekülen.

Lassen Sie die Zellen in einem salzreichen Puffer mit einem Reinigungsmittel wieder suspendieren, um oberflächenhaftende Biomoleküle zu lösen.

Zentrifugieren Sie erneut, entsorgen Sie den Supernatant und lassen Sie die Zellen im Puffer wieder suspendieren.

Übertragen Sie die Suspension auf einen Filter und eine Zentrifuge, um den Durchfluss mit nicht internalisierten Biomolekülen zu entsorgen. Anschließend spülen Sie die Zellen mit frischem Puffer ab und suspendieren Sie sie erneut.

Stellen Sie die Zellen auf ein Agarose-Pad und legen Sie einen Deckzettel an. Die fluoreszieren